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enzymes de restriction



  1. #1
    Weasley14

    enzymes de restriction

    Bonjour à tous , j'ai lu dans la description des enzymes de restriction : " Produites par les bactéries , les enzymes de restriction sont un moyen de se défendre contre les infections par des virus " ça veut dire que ce sont seulement des enzymes produites in vitro , pas in vivo ?

    -----


  2. Publicité
  3. #2
    Flyingbike

    Re : enzymes de restriction

    non, ca veut dire qu'à l'origine, les enzymes de restriction sont un moyen de défense des bactéries contre les virus.

  4. #3
    Weasley14

    Re : enzymes de restriction

    d'accord merci. http://biologie.univ-mrs.fr/upload/p...diantfinal.pdf (page 2 le mode d'action des enzymes de restriction) les enzymes générant des bouts collants vont a chaque fois couper après un G ou ça dépend et ceci est seulement un exemple ? qu'est ce qui confère a l'enzyme sa faculté a généré soit des bouts collant 5' soit 3' ?

  5. #4
    Flyingbike

    Re : enzymes de restriction

    "enzyme de restriction" regroupe tout un tas de nucléases (=qui coupent l'adn) dites "endonucléases" (=parce que ca peut couper au milieu d'un double brin).

    Il en existe des centaines (milliers ?) qui reconnaissent en général des séquences de 6 nucléotides, palindromiques (d'autres reconnaissent des séquences plus courtes ou plus longues).

    Certaines génèrent des bouts francs (= blunt en anglais) ou collants (=sticky, avec un brin qui dépasse en 5' ou 3') et il n'y a pas de règle générale. (voir ici : http://www.web-books.com/MoBio/Free/images/Ch9At.gif pour exemples).

    Ce qui donne la spécificité à une enzyme ? sa conformation qui lui permet une reconnaissance plus ou moins spécifique de la séquence cible.

  6. #5
    BioChemGuru

    Re : enzymes de restriction

    Citation Envoyé par Weasley14 Voir le message
    qu'est ce qui confère a l'enzyme sa faculté a généré soit des bouts collant 5' soit 3' ?
    La séquence d'ADN est le principal facteur qui détermine la spécificité d'une enzyme de restriction à couper l'ADN bicaténaire à un endroit précis.

    1) exemple avec l'enzyme BamHI qui coupe dans la séquence 5'-G*GATCC-3'. L'enzyme va couper la liaison covalente phosphodiester entre les 2 G de la séquence et va laisser un groupe phosphate 5' exposé et un groupe hydroxyle 3' en retrait. On parle alors d'une extrémité collante 5' (5' cohesive ends, ou 5' overhang ou surplomb 5').

    2) exemple avec l'enzyme Sac I qui coupe dans la séquence 5'-GAGCT*C-3'. L'enzyme va couper la liaison phosphodiester entre le T et le C de la séquence et va laisser un groupe phosphate 5' en retrait et un groupe hydroxyle 3' exposé. On parle alors d'une extrémité collante 3' (3' cohesive ends, ou 3' overhang ou surplomb 3').

    A noter que dans des applications de biologie moléculaire du gène impliquant les techniques courantes du génie génétique, la spécificité de coupure (on parle alors de fidélité de l'enzyme) peut être artificiellement altérée par les conditions dans lesquelles la digestion d'ADN s'effectue par chaque enzyme de restriction. On parle alors d'activité "star" qui altère la fidélité de l'enzyme. Les conditions expérimentales de rapport enzyme:substrat, volume de digestion, temps de digestion, force ionique et pH des tampons de digestion, présence ± concentrée de glycérol ont toutes un fort impact sur la fidélité de l'enzyme à couper la séquence d'ADN à l'endroit désiré et pas n'importe où ailleurs.

    Cordialement,

    BCG

  7. A voir en vidéo sur Futura

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