enzymes de restriction

[invite3c320e64]

Bonjour, est ce que quelqu'un aurait une idée sur comment vérifier l'efficacité de la digestion enzymatique par les enzymes de restriction?est ce par électrophorèse?
Merci d'avance
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[invitee863e61a]

Bonjour, est ce que quelqu'un aurait une idée sur comment vérifier l'efficacité de la digestion enzymatique par les enzymes de restriction?est ce par électrophorèse?
Merci d'avance

Lorsqu'une enzyme de restriction a efficacement digéré un ADN, cet ADN est coupé en un ou plusieurs sites ?. Comment vérifier qu'un ADN est coupé ? Cette technique fonctionne-t-elle quelque soit mon type d'ADN (génomique, plasmidique, produit de PCR, etc.) ?

Donne-nous tes pistes de réflexions? Comment en est tu venu à l'électrophorèse ?

[invite3c320e64]

mon adn est coupé en plusieurs sites.
Pour vérifier qu'un ADN est coupé, il faut le mettre en présence de désoxyribonucléotide fluorescents, si l'adn est coupé ces désoxyribonucléoitides vont se fixer sur l'extrémité 3'OH libre, est cela?
Merci

[invitee863e61a]

mon adn est coupé en plusieurs sites.
Pour vérifier qu'un ADN est coupé, il faut le mettre en présence de désoxyribonucléotide fluorescents, si l'adn est coupé ces désoxyribonucléoitides vont se fixer sur l'extrémité 3'OH libre, est cela?
Merci

Cette technique me parait très chère (à cause de la fluorescence qui requiert équipement et consommables onéreux) et pas très pratique.
L'électrophorèse est une bonne idée: quand un ADN est coupé, il n'a plus la même taille, d'où le choix de l'électrophorèse qui est LA technique permettant de séparer des molécules d'ADN de tailles différentes.
Ceci dit, cela ne fonctionne pas dans tous les cas, par exemple si la taille de la molécule après digestion est très proche de celle avant digestion (cas des sites de restrictions aux extrémités d'un produit de PCR).

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite3c320e64]

merci beaucoup pour votre aide

[piwi]

Imaginons que vous ayez un fragment de 3kb avec au tiers un site EcoRI. Vous coupez et vous faites migrer.
Plusieurs possibilités:
Vous avez une bande de 1kb et une bande de 2kb. Vous avez une coupure optimale.
Vous avez une bande de 3Kb. Votre enzyme n'a pas coupé.
Vous avez une bande à 3Kb, une à 1Kb et une à 2Kb. Votre coupure n'est pas parfaite. Vous pouvez évaluer l'efficience en jugeant l'intensité de la bande à 3Kb. Si elle est très intense, votre efficacité de coupure est mauvaise, si elle est peu intense c'est pas mal.

Vous voyez l'esprit?

Cordialement,
piwi

[invite3c320e64]

oui je vois le principe
merci beaucoup pour votre aide