[Biologie Moléculaire] Restriction avec 3 enzymes ?
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Restriction avec 3 enzymes ?



  1. #1
    invite1ab82086

    Restriction avec 3 enzymes ?


    ------

    Salut,

    C'est encore moi, je dois purifier une bande sur gel mais même en faisant migrer longtemps sur du 1% agarose ma bande est trop proche d'une bande parasite (2500bp et 3000bp). Je vais essayer en changeant le % d'agarose (d'ailleurs que me conseilleriez vous comme %) et quelqu'un a t il déjà fait une triple disgestion avec des enzymes de restriction. Je pose cette quesion car je peux ajouter l'enzyme BamHI avec le même buffer qui raccourcira de 500bp la bande parasite (celle a 2500pb) et donc me laissant peut etre plus de place pour la découpe ?
    Le truc là, c'est que je dois avoir une super belle bande isolée car c'est pour injecter en blastomères de souris pour générer une transgenique, je ne peux pas me permettre d'avoir d'ADN contaninant. C'est ma première transgenique alors glups !

    Bien à vous

    Remo

    -----

  2. #2
    invitec9f0f895

    Re : Restriction avec 3 enzymes ?

    salut


    séparer une bande a 2,5Kb d'une bande a 3Kb ne devrait te poser aucun probleme sur des gels a 0,5% ou 0,8%! tu es encore de la gamme de resolution qui est tres bonne.

    YOyo

  3. #3
    invite1ab82086

    Re : Restriction avec 3 enzymes ?

    Merco yoyo
    C'est qu'en fait je vais en déposer pas mal, genre 30 à 50 µg du coup j'ai peur d'avoir des patés qui se contaminent l'un l'autre (mais en fait je me demande si je vais pas faire plusieurs migrations séparées pour avoir des spots plus petits et plus faciles à découper) ?

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