Bonsoir ,
Je suis etudiante en deuxieme année de licence chimie biologie et j'aimerai si possible avoir de l'aide sur mon exercice. Je tiens a préciser que j'ai déja la correction et que ca fait pas mal de temps que jessaye de la comprendre. Je n'arrive pas a trouver le raisonnement de prof. Je souhaite reviser cet exercice car il risque de tomber a l'examen que l'on devra faire a la maison donc je ne veut pas le mettre de coté.
Voila le sujet : Définir les séquences de deux amorces et les conditions de PCR permettantd'amplifier un produit d'au moins 200 bp à partir de la séquence suivante (écrire les séquences de 5' vers 3' et préciser les coordonnées du premier et du dernier nucléotide de chaque amorce). Indiquer la taille du fragment amplifié.
1 ATCGTTACCC AAAAACCTCT GTTTCGATTC CTAGACACTC TCACTAGGGT 50
51 TTTACAACTA TGGCAACGAC TCGAATGGTT AGGGTTTCGC AAGATGGTTC 100
101 GGGAGATTAC TGCTCTGTTC AAGACGCAAT TGATTCGGTG CCTTTAGGTA 150
151 ACACTTGCAG AACTGTGATT CGTCTCTCAC CTGGGATTTA TCGGCAACCT 200
201 GTGTATGTAC CCAAGAGGAA GAATTTCATT ACCTTCGCCG GAATCTCACC 250
251 GGAGATCACG GTTTTGACTT GGAACAATAC AGCTTCCAAG ATTGAGCATC 300
301 ACCAGGCGTC TAGAGTCATT GGGACTGGTA CGTTTGGTTG TGGTAGTGTT 350
Alors je sais qu'il nous faut une amorce F ( sens) et une amorce R ( anti sens ). Je sais que l'ADN polymerase va synthétiser l'ADN a partir des amorces en commençant par le coté 3'. Les Tm de formule : 4(G+C) + 2(A+T) , doivent etre proches pour pouvoir choisir une bonne température pour les deux.
Éloignement entre amorce F et amorce R 2kb max. Pas + de 4 même nucléotides a la suite dans l'amorce.
Questions :
-Comment dois je procéder ?
-Dans l'énoncé on nous dit que on veut obtenir un produit de PCR d'au moins 200bp ... 200 paires de bases = 200 paires de nucleotides .
Quand on parle de une paire de base c'est 1 nucleotide sur chaque brin c'est ca ?
-Comment savoir combien de nucléotides fait une seule amorce ?
-Comment calculer la taille du fragment amplifié ?
Merci d'avance =)
Une étudiante qui a hâte de lire vos explications =)
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