Croissance bactérienne

[pomme1]

Bonsoir,
Je souhaite tester l’efficacité d’un conservateur antimicrobien. Pour cela, je dois avoir au départ une population bactérienne de 10^8 ufc/ml.
Mais je pars de pastilles lyophilisées (exemple du staphylococcus aureus). Après réhydratation dans du tryptone sel pour avoir une suspension à 1000UFC/mL, je pensais ensemencer en surface 100µL de cette suspension sur une gélose trypticase soja et incuber la gélose pendant 18-24h à 30-35°C.
Après je pensais prendre quelques colonies et les mettre en suspension dans du tryptone sel.
Je ne sais pas si déjà je suis bien partie ?

Après pour faire le décompte dans cette dernière mise en suspension et savoir si je suis bien arrivée à 10^8ufc/mL, est-ce que je peux utiliser une cellule de Thoma ou de Malassez pour effectuer le décompte ? Ou bien est-ce que je peux faire un dénombrement en profondeur mais cette technique s’avère très longue, surtout s’il faut rediluer…
Après, j’ai aussi lu qu’on pourrait avoir la concentration par le biais de l’absorbance en se plaçant à 600nm : mais comment savoir que j’ai atteint ma concentration voulue ?
J’ai lu beaucoup de choses mais je n’arrive toujours pas à savoir comment je fais en pratique face à mes tubes/géloses…
Merci pour votre aide !
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[Flyingbike]

dans quel contexte faites vous ces expériences ?

Après réhydratation dans du tryptone sel pour avoir une suspension à 1000UFC/mL,

Cela me parait peu envisageable de reprendre un lyophilisat en espérant avoir un nombre d'UFC défini...

Après pour faire le décompte dans cette dernière mise en suspension et savoir si je suis bien arrivée à 10^8ufc/mL, est-ce que je peux utiliser une cellule de Thoma ou de Malassez pour effectuer le décompte ? Ou bien est-ce que je peux faire un dénombrement en profondeur mais cette technique s’avère très longue, surtout s’il faut rediluer…
Après, j’ai aussi lu qu’on pourrait avoir la concentration par le biais de l’absorbance en se plaçant à 600nm : mais comment savoir que j’ai atteint ma concentration voulue ?

Le comptage en cellule sera très compliqué, surtout avec S. aureus. Pour l'absorbance, c'est très peu fiable.

J'ai du mal à comprendre votre protocole et le moment ou vous mettez les bactéries en présence du conservateur.