accelérer procédé de préparation géloses pour bactério?

[invite52d97fbe]

Bonjour,

Je suis enseignante et je voudrais faire préparer des géloses bactério GTS (Géloses Trypticase Soja) à mes élèves en TP avec les étapes suivantes
-pesée de la poudre (mélange déjà prêt) et dissolution
-ajustement du pH par ajout NaOH ou HCl si nécessaire (vérification approximative du pH à l'aide de papier pH)
-autoclavage
-coulage en boîtes de Petri pour ensuite effectuer des ensemencements bactériens

J'ai besoin de l'expérience de ceux qui font ça souvent, car je me demande si l'ajustement pH est vraiment nécessaire ou si on "tombe" à peu près sur le bon pH quand on dissout la poudre dans l'eau distillée

Peut-on faire la dissolution au micro-ondes, en erlen, comme on le fait couramment pour les gels d'agarose pour la bio mol, ou est-ce que ça provoque trop d'évaporation du liquide? (gélose + concentrée que prévu) / trop de bulles? (et débordements dans le microondes)

Et s'il n'est pas nécessaire d'ajuster le pH, alors est-ce qu'on peut directement peser la poudre dans le flacon qui sera autoclavé, ajouter l'eau et autoclaver sans avoir fait au préalable bouillir pour la dissolution? (ça permettrait un gain de temps +++ sur le TP, et ça évite les risques de brûlures lors du transfert du mélange dans les flacons pour autoclave après dissolution, et ça m'arrangerait, et je me dis que les 20 minutes d'autoclave doivent générer une ébullition suffisante pour dissoudre la poudre, non?). Si je prévois 1/3 de volume sans liquide en haut des flacons à autoclaver, c'est suffisant ou ça risque de déborder?

Merci d'avance pour vos réponses!
-----

[Flyingbike]

Que voulez vous faire pousser sur ces géloses ?


Vous pouvez éviter l'ajustage du pH, normalement il n'en a pas besoin.

On peut tout à fait autoclaver la poudre dans le liquide, c'est largement suffisant et tous les labos que je connais procèdent ainsi. C'est même mieux car certains milieux n'aiment pas l'excès de cuisson (ce n'est pas le cas du TS)
Il faut juste veiller à homogénéiser le milieu en sortie d'autoclave, généralement la gélose se retrouve en bas.

Vous pouvez autoclaver des bouteilles quasi-pleines, l'important est de ne pas ouvrir de valve avant que la pression ne soit redescendue à zéro (normalement vous ne pouvez pas, a moins d'avoir une antiquité), car c'est à ce moment là que le milieu peut bouillir et déborder.

Si vous utilisez le milieu dans la journée ou le lendemain, vous pouvez le conserver en surfusion à 50° pendant des heures pour qu'il soit prêt à l'emploi.

Le milieu refroidi et solidifié en bouteille peut également être refondu au micro ondes (par petits cycles avec agitation). Il m'arrive de couler 1L en 4 ou 5 fois

[invite52d97fbe]

Merci infiniment pour cette réponse très précise! Les géloses seront utilisées pour cultiver des germes peu exigeants et de classe 1 (E. coli pour certains élèves, Saccharomyces cerevisiaeae pour d'autres, on comparera le développement sur TCS, sur Sabouraud et sur milieux sélectifs selon les germes étudiés, mais ils ne prépareront eux-mêmes que les TCS).
Je vais donc tenter la méthode rapide