Bonjour, j'ia besion d'aide pour répondre aux questions de mon exercice :

La formation d'une molécule de collagène mature est un processus complexe. Le procollagène est tout d'abord formé de trois chaînes de collagène qui possèdent
des extensions aux extrémités N- et C-terminales. Une fois que les chaînes ont été correctement enroulées ensemble, les propeptides terminaux sont élimines. La
fonction principale des propeptides terminaux pourrait être d'aligner correctement les chaînes, pour faciliter leur assemblage.
Deux formes de molécules de collagène de type III ont été utilisées pour étudier l'assemblage du collagène : (l) la molécule de collagene de type III mature, et (2)
un précurseur ayant toujours ses propeptides N-terminaux, le pN-collagène de type III. Dans ces deux types de molécules de collagène, les différentes
chaînes sont maintenues ensemble par des ponts disulfure. Ces liaisons maintiennent les chaînes de sorte qu'elles coïncident, même après avoir été totalement déroulées, et peuvent se réassembler correctement en molécules de collagène.

Le réassemblage de ces deux molécules de collagène a été étudie, après dénaturation a 45°C, dans des conditions telles que les ponts disulfure restent intacts. La température est réduite a 25°C pour permettre un réassemblage, et on prélève des échantillons pendant 60 minutes, a intervalles réguliers. Chaque
échantillon est immédiatement digéré par la trypsine, qui clive rapidement les chaînes dénaturées, mais n'attaque pas l'hélice de collagène. Quand les
échantillons sont analyses par électrophorèse sur gel-SDS en présence de mercaptoethanol, qui rompt les ponts disulfure, les deux collagènes produisent des électrophorégrammes identiques. Fait significatif, si les ponts disulfure sont laisses intacts au cours de l'électrophorèse sur gel-SDS, toutes les bandes sont remplacées par des bandes ayant un poids moléculaire trois fois plus important.

A. Pourquoi tous les peptides résistants ont-ils un poids moléculaire trois fois plus important quand les ponts disulfure sont laisses intacts ?

B. Quel groupe de ponts disulfure (N-terminal ou C-terminal) du pNcollagène de type III est responsable de l'augmentation du poids moléculaire de ses peptides résistants?

C. Le réassemblage de ces molécules de collagène débute-t-il en un site spécifique, ou en des sites aléatoires ? Si elles se réassemblent a partir d'un site spécifique, déterminer sa localisation.

D. Le réassemblage suit-il un mécanisme du type « fermeture éclair» ou du type « tout ou rien »? Comment les résultats distinguent-ils ces mécanismes?

On a une première figure représentant les formes natives et dénaturées du collagène de type III et du pN-collagène de type III; une seconde représentant les résultats de l’analyse du réassemblage du collagène de type III et du pN-collagène de type III. Après des temps variés de renaturation à 25°C, des échantillons sont digérés par la trypsine, et soumis à électrophorèse. Les aires colorées indiquent les positions des peptides trypsine-résistant. Les nombres entre parenthèse indiquent le nombre approximatif d’acides aminés des peptides trypsine-résistants.