Dilution pour immunohistochimie

[invitec8dc33c5]

Bonjour,

Je vous écris concernant une question sur dilutions et immunohistochimie. Peut-être pourriez-vous m'aider?

A propos de la dilution d'anticorps pour un dosage d'immunohistochimie. La dilution souhaitée est de 1: 100. Le premier protocole que j'ai utilisé disait d'ajouter 10 ul dans 1000 ul de tampon. J'ai considéré que cette quantité d' anticorps était trop importante, mais je crois que c'est toujours correct puisque le facteur de dilution est 1000/10=100.
Après cela, un nouveau protocole était disponible, et ce dernier protocole disait de faire une dilution 1:100 et de préparer 500 ul de solution d'anticorps primaire. J'ai donc préparé 5 ul d'anticorps que j'ai rajouté dans 500 ul de tampon (puisque 500/5 = 100, facteur de dilution). J'ai demandé des gens autour qui m'ont dit que c'était correct...mais...

Je vois que certaines personnes considèrent qu'il faut 5 ul d'anticorps et 495 ul de tampon pour atteindre le volume final de 500 (ou dans le premier cas 10 ul d'anticorps et 990 ul de tampon).

Laquelle de ces façons de faire est valide ? Est-ce correct d'ajouter 5 ul d'anticorps dans 500 ul de tampon pour avoir une dilution de 1:100 ? Je suis confuse concernant le volume total.
Merci beaucoup pour votre temps et votre aide.
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[Flyingbike]

Mettre 5 et 500, cela fait 5 dans 500+5 soit une dilution au 101e. C’est à dire pas une dilution au 100e.

Après, dans les faits, et surtout pour de l’IHC, vous mettez 5 dans 495 ou 5 dans 500, ça ne changera rien !

[invitec8dc33c5]

Bonsoir,
Merci de votre réponse rapide. En effet, ce qui m’a embrouillé c’est de voir les gens en IHC utiliser parfois, par exemple, 3ul en 300ul et dire dans la pratique qu’il s’agit d’une dilution 1/100. Alors que dans le calcul , comme vous le signalez, cela ne donne pas 1/100.
D’un autre côté, la technique en soit fonctionne, car pour ce type d’expérience ce n’est pas vraiment la précision extrême de volumes qui va changer les choses.
Donc, comme vous le mentionnez, cela ne change pas vraiment grand chose.
Ces deux contrastes créent la confusion.
Est-ce qu’il est courant en immunohistochimie de faire ce type de pratique, d’arrondir un peu les petits volumes (5ul pour 500ul , etc) ?
Merci encore

[Flyingbike]

Oui c’est très courant. Ce genre d’arrondi n’a pas de conséquences en IHC (du moins pour de telles dilutions)

Dans d’autres cas ou avec des dilutions plus petites on fera attention.

[A voir en vidéo sur Futura]