Immunohistochimie

[invite9937912f]

Bonjour à tous,

Y'a plusieurs points que je n'ai pas compris dans cette technique d'abords c'est les témoins négatifs et positifs.

Dans mon cours j'ai :
Témoins négatifs : utilise la méthode d'omission de l'Ac primaire en utilisant un Ac de même type mais non spécifique et on va regarder si on a un signal. Si on a un signal cela veut dire que ça ne correspond pas à ce qu'on cherchait.

Témoins positifs :est sur une lame de manière à savoir si la technique a marché ou pas.

Je n'arrive vraiment pas à comprendre ..

Aussi quand on fait par exemple une technique IHC et qu'on dit que c'est + ou - , + ça veut dire que l'anticorps a agit avec l'antigène et qu'il est bien présent ? Et - qu'il n'est pas présent ? Ca parait bete mais je m'embrouille donc je préfère que ça soit clair dans ma tête.

Merci d'avance !
-----

[invite74b9e03b]

Salut,

Pour un témoin négatif je pense que l'omission de l'anticorps primaire suffit. On ajoute simplement le secondaire (Les anticorps ça coute cher) sinon, oui on peut ajouter un anticorps primaire diriger contre quelque chose qui n'est pas sensé être dans le tissu.
Pour le témoin positif sur la même lame on utilise un anticorps primaire dirigé contre une autre cible dont tu sais qu'elle est présente sur le tissu que tu regarde (mais lui couplé à un secondaire qui émet un signal différent pour pouvoir distinguer ton témoin du reste). Aussi tu utilises une lame sur laquelle tu sais que ce que tu cibles est la (au moins pour montrer que le primaire fonctionne (toujours vérifier)) mais ça c'est plus de la mise au point

En gros témoin négatif: tu montres que ton signal est spécifique et que le signal que tu as (si signal il y a) n'est pas due à un gag.
Témoin positif : tu montres que ça a fonctionné et que si jamais tu n'as pas de signal ce n'est pas due à un problème de révélation.

+ = signal positif : tu détectes ta cible donc elle est sur le tissu et tu peux voir ou exactement (attention au marquage diffu qui peu traduire la non spécificité de l'Ac)
- = signal négatif : tu ne détectes pas ta cible (elle n'est peut être pas dans le tissu (*gag possible))

Bonne fêtes

Camu

[invite9937912f]

Merci beaucoup pour ta réponse et bonne fête à toi aussi !

Mais y'a encore quelque chose qui m'échappe, quand on fait une IHC c'est avec des anticorps dirigés contre des antigènes, dans ces cas là quand on fait par exemple une IHC anti-insuline (donc lui c'est anticorps si j'ai bien compris), dans le pancréas et qu'on a une réponse positifs, comment ça se fait que ça soit positif puisque dans la cellule on a des gènes de l'insuline et pas des anti-gènes (qui sont normalement mauvais non ? ) ..

Merci d'avance !

[invite74b9e03b]

Attention, je pense que tu fais quelques confusions: un antigène (qui est une protéine, pas un gène), n'est, ni bon, ni mauvais. On qualifie d'antigène la cible d'un anticorps. En IHC on détourne le rôle des anticorps, on utilise leur propriété à reconnaître spécifiquement une cible (antigène). On peut produire toutes sortes d'anticorps dirigés contre tout et n'importe quoi. Donc dans ton cas tu auras acheté des anticorps dirigés contre l'insuline à une boite qui sait produire ces anticorps. Ainsi tu dispose d'anti corps anti insuline.

Camu

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite9937912f]

Merci pour ce cadeau de Noel ! Ca devient beaucoup plus clair et logique !
Bonne fête encore une fois