Bonjour à tous,
Voilà, le protocole d'IHC du labo dans lequel je suis indique d'ajouter de l'héparine dans le tampon de blocage (KPBS 50mM, Triton 0,4%, BSA 2%, Héparine 415 U/mL).
J'ai cherché dans différents protocoles l'utilité de l'héparine, mais c'est l'impasse! Quelqu'un aurait une idée de la raison d'être de l'héparine dans un protocole d'IHC ?
Merci !
Bonjour,
Attention aux abréviations, il vaut mieux l'expliciter la première fois (j'ai pensé à insuffisance hépatocellulaire en premier réflexe...). Donc on parle bien d'immunohistochimie ici je présume.
Quel est le contexte plus général ? Y a t-il une analyse génétique a posteriori ? Sinon simplement comme anticoagulant ou comme facteur stabilisateur de je ne sais quoi peut-être.
H u m a n i t y
Oui, immunohistochimie... sur tranches de cerveaux. J'avais pensé à l'aspect anticoagulant, toutefois je ne vois pas en quoi cela est vraiment nécessaire... J'ai essayé le même protocole sans l'héparine et j'arrive aux mêmes résultats.
Titre modifié en conséquence.
H u m a n i t y
Qu'étudiez-vous sur ces tranches de cerveaux ?
H u m a n i t y
bonjour,
Tout d'abord, quelle est la nature de vos tranches de cerveaux, comment sont-elles conservées, quelle épaisseur, quelle cryoprotection...
Pour ma part, je ne mets pas d'héparine pour faire mes tranches de cerveau, et dieu sait que j'en fais, elles marchent toutes très bien.
Cordialement
nowell
L'héparine peut aussi tenir de la superstition.
Dans certains labo il y a une vingtène d'année on mettait de l'héparine quasiment partout, sans forcément d'utilité, juste au cas ou.
Le protocole ayant fonctionné il est resté tel quel.
Dans beaucoup de labo les gens ayant un protocole qui fonctionne n'assaillent pas de le changer par peur que ça ne marche plus.
C'est pourquoi beaucoup de gens utilisent encore le méthanol qui est vraiment pas top pour la santé alors que l'éthanol peut le remplacer facilement...
Ratafouin : j'ai l'impression que c'est la réponse à ma question.
Nowell : rat, 30µm, -20° (solution d'antifreeze : tampon phosphate, DEPC, éthylène glycol, glyrérol)
Merci à tous!
J'en ai parlé à un expert en imagerie de la cellule et en fixation, immuno et tout ce qui est satellite à cela. l'expert a en l'occurence 62 ans, c'est pour dire qu'il a de la bouteille.
Je vous confirme que l'héparine n'a pas d'intérêt, avec les techniques actuelles.
Et votre préparation ne semble pas justifier l'utilisation d'héparine.
Merci beaucoup!
Mais avant, ça servait à quoi ?Envoyé par nowell
Il semblerait que la technique d'héparine (ou d'histamine selon les protocoles) serve particulièrement aux immunostaining de cellules immunitaires.
Par contre je n'en sais pas plus.
