Bonjour à tous,
je suis préparateur de laboratoires dans une école secondaire et parfois je dois couler des milieux qui vont être utilisés seulement 2-3 semaines plus tard.
Je voudrais savoir s'il était possible d'utiliser une étuve pour stériliser des boite de pétris avec un milieu de culture. Ou pensez-vous que stocker les boites de pétri au frigo est suffisant ?
Merci beaucoup d'avance à ceux qui me répondront.
Bien à vous
lepreparateurdelabo
Non, on ne peut pas stériliser des boites de milieu car le plastique ne résiste pas.
Normalement on fait comme ça :
-préparation du milieu, stérilisation à l'autoclave, récupération du milieu en surfusion (50°), coulage dans les boites stériles, stérilement, stockage à 4° pendant quelques semaines
ou
-préparation du milieu et stérilisation, stockage (plusieurs mois) et au besoin, fusion du milieu au micro ondes, et coulage stérile dans des boites stériles.
La stérilité des boites résulte de la stérilité du milieu préparé et des boites qui sont stériles commercialement. Pas de stérilisation des boites une fois préparées.
En ce qui concerne le stockage : plusieurs jours au frigo, couvercle en bas, plusieurs semaines (selon milieu) au frigo, dans un sachet hermétique, toujours couvercle en bas.
L'humidité des boites est un critère décisif.
La vie trouve toujours un chemin
Bonjour Flyingbike,
merci beaucoup pour ta réponse très complète.
Je travaille avec des poudres déshydrater (Merckx) et une fois le milieu à quasi-ébullition, soit :
1°) je bouche mon erlen avec un bouchon en caoutchouc, puis refroidit sur table, puis frigo (Combien de temps penses-tu que cela puisse tenir ?). Plus tard (1-2 semaines), mes collègues passe l'erlen au bain-marie puis coule directement, puis les élevés ensemence directement.
2°) je coule directement dans des boites de pétri. C'est à ce moment-là que j'avais des interrogations.
J'aurai une question sur l'humidité des boite que tu cites : en quoi est-ce un critère décisif ? En quoi/sur quoi cela joue-t-il ?
Est-ce que cela fonctionne aussi avec des boites non stériles ? Car quand je commande du matériel, je vois parois que l'on vend des boites non stériles (ce qui m'étonne d'ailleurs).La stérilité des boites résulte de la stérilité du milieu préparé et des boites qui sont stériles commercialement.
Merci beaucoup d'avance pour ta réponse.
Bien à toi
lepreparateurdelabo
dans les deux cas, si vous n'atteignez que la semi-ébullition, vous n'avez pas de réelle stérilité (ce qui peut ne pas être un réel problème)
Ensuite, un milieu gélosé se gardera mieux en erlen, et le repassage en liquide lors du coulage permet de tuer ce qui aurait survécu à la première ébulition. Donc à défaut d'autoclave la première solution est plus safe.
La seconde est effectivement plus pratique, mais la conservation des boites coulées est moins bonne, surtout si vous n'avez pas de réel cycle de stérilisation. Ensuite, dans la pratique si ça fonctionne bien il ne faut pas vous gêner.
Pour l'humidité, en principe quand on coule une boite on ne la referme pas tout de suite
-de la condensation se forme dans le couvercle
-la condensation peut transporter des contaminations depuis la périphérie vers l'intérieur de la boite
-l'humidité empêche, selon les cas, un ensemencement correct car la gélose est gorgée
-une fois ensemencée, l'humidité peut mettre le bordel si ça goute en surface, par exemple pour faire des isolements
à l'inverse une boite trop sèche se garde moins longtemps, puisqu'elle finit par se transformer en chips.
La vie trouve toujours un chemin
Je voulais éditer mon message précédant, mais je n'ai pas trouvé comment faire.
Je travaille dans plusieurs écoles, donc je ne suis pas présent tous les jours au même endroit. C'est pour ça que j'essaie de trouver des "alternatives" pour gagner du temps ou rallonger le temps de maintien de certaines "solutions". Et le domaine de la biologie/biochimie n'est pas mon domaine d'expertise (je connais les bases et je comprends les principes dans les grandes lignes, mais je ne maitrise pas les spécificités/particularités ou manières de procédé). Et aussi, je ne suis pas équipé comme dans un laboratoire de recherche, donc je fais avec les moyens du bord.
Quand je dis quasi-ébullition, je suis entre 95 et 100°C (j'ai des bulles dans le fond de l'erlen, mais je ne vais pas plus loin sinon ça déborde).si vous n'atteignez que la semi-ébullition, vous n'avez pas de réelle stérilité
Combien de temps penses-tu que cela puisse tenir au frigo ? 2-3-4 semaines ?je bouche mon erlen avec un bouchon en caoutchouc, puis refroidit sur table, puis frigo
Je n'ai pas de stérilisation (pas d'autoclave ou quoi que ce soit ; d'où la question de l'étuve)surtout si vous n'avez pas de réel cycle de stérilisation
C'est ce que je fais déjà pour beaucoup d'autre chose.dans la pratique si ça fonctionne bien il ne faut pas vous gêner.
Je viens de voir sur Youtube que l'on coule la boite, ça durcit, puis on la stock tête en bas pour la condensation. Ils disent que ça peut se conserver ainsi jusqu'à 3 mois (en fonction des milieux je supposes).en principe quand on coule une boite on ne la referme pas tout de suite
Merci beaucoup d'avance.
Bien à toi
lepreparateurdelabo
Je garde les milieux stériles à température ambiante. Dans ces conditions, selon les milieux, ça se garde largement plusieurs mois.Envoyé par lepreparateurdelabo
Ben oui j'avais compris. Pour la plupart des applications, la quasi ébullition tue tout. Sur certains milieux, des trucs peuvent se développer après avoir survécu à la chaleur étant sous forme de spores par exemple.Je n'ai pas de stérilisation (pas d'autoclave ou quoi que ce soit ; d'où la question de l'étuve)
C'est ce que je fais déjà pour beaucoup d'autre chose.
Le mieux, c'est quand même de faire sécher la boite ouverte, mais sans PSM, c'est plus compliqué. Vous travaillez à la flamme ? On limite déjà bien la condensation en coulant un milieu qui a déjà refroidi. Moi je mets au BM à 50°, c'est encore fluide et ça permet de ne pas saturer le couvercle en humidité, ce qui se produit quand on coule un milieu bouillant.Je viens de voir sur Youtube que l'on coule la boite, ça durcit, puis on la stock tête en bas pour la condensation. Ils disent que ça peut se conserver ainsi jusqu'à 3 mois (en fonction des milieux je supposes).
Pour la conservation, effectivement ça dépend du milieu mais 3 mois ça se fait, sous réserve que la gélose ne sèche pas (conservation en boite ou en sachet fermé)
La vie trouve toujours un chemin
