Hello!
J'ai réalisé un test ELISA indirect dans lequel j'ai testé un anticorps purifié dilué en cascade. J'ai obtenu différentes valeurs de DO inversement proportionnelles aux dilutions.
La question que je me pose, c'est : est-ce que je peux dire que la plus grande dilution pour laquelle j'ai une valeur positive de DO correspond à un seuil de sensibilité? de détection? de mon anticorps?
Merci beaucoup d'avance
Noory
oui, mais non
Pour avoir un vrai seuil de sensibilité (ou de détection), il faut connaitre la variabilité de la mesure. Même un "blanc" peut donner une DO positive, il faut donc que le signal donné par la concentration correspondant au seuil de sensibilité soit statistiquement différente de celui donné par le blanc.
La vie trouve toujours un chemin
on peut considérer le signal statistiquement différent une fois les signaux non spécifiques (comme le blanc et les différents contrôles) soustraits aux valeurs obtenues, non?
non, justement car la variabilité du signal pourrait vous faire conclure de façon inadaptée. Si vous preniez 10 points sans échantillon, en en choisissant 5 au hasard comme blancs et les 5 autres comme échantillons, vous auriez peu de chance de trouver zero pour les "échantillons" une fois la soustraction faite, et vous pourriez, si la valeur est positive (ce qui a à peu près une chance sur deux d'arriver) conclure que vous avez un signal alors que non.
Pour cette raison, de façon générale on fixe la limite basse comme étant égale à la moyenne du signal sans échantillon + 3x l'écart type.
La vie trouve toujours un chemin
ah... je comprends
mais alors, pourquoi tester l'anticorps purifié par ELISA? j'avais fait cette condition dans l'espoir de trouver cette fameuse quantité d'Ac seuil...
ça peut vous aider : https://www.bioreba.ch/saas/CustomUp...a_Analysis.pdf
La vie trouve toujours un chemin
super merci beaucoup! je penserai à faire un triplicat la prochaine fois ^^
