Problème en biologie moléculaire

[invite1eba5460]

Bonjour,

Je suis entrain de reviser pour le ratrapage et j'essaye de refaire mon exam de cette année mais j'ai un doute sur une question :

"a) comment isoler un gene X à partir d'un ensemble de gènes. On suppose que l'on dispose d'une sonde X d'acides nucleiques correspondant à ce gène.
b) On souhaite savoir si ce gène est present chez un angiosperme et chez les oiseaux. quelles experiences realiserez vous? donner les conditions experimentales"

Je pense que c'est pcr pour le petit a et southern pour la question b mais je ne suis pas sure de moi à 100%
Quelqu'un pourrait-il me confirmer cela?
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[invite5351d78c]

Salut,

Pour le petit a, le mieux est de cribler une banque d'ADN génomique, tu prélève l'endroit marqué, tu l'étale sur boite de Pétri, tu recribles et là tu seras sûre que l'endroit où tu prélève correspond au clone contenant ton gène. Pour la PCR, il aurait fallu que tu ais 2 amorces encadrant le gène, donc dans ton cas c'était impossible.

Petit b, il faut faire ce qu'on appelle un Zoo-blot, mais c'est en fait un southern. C'est l'utilisation qu'on en fait qui lui donne ce nom. Il sert à déterminer les régions de génomes homologues entre les espèces, ce sont des régions conservées au cours de l'évolution. Mais ce qui reste efficace est le criblage de banques informatiques. Si tu connais la séquence de ta sonde, tu crible des banques informatiques d'angiospermes et d'oiseaux et tu vois si le pourcentage d'homologie est correct (je pense que ce pourcentage doit être supérieur à 80% pour qu'il y ait une bonne homologie). Pour le southern, il faudrait que tu coupe les génomes voulus avec une enzyme de restriction qui coupe rarement (reconnaissant des séquences palindromiques de 8 bases), tu fais un southern en criblant avec ta sonde et selon l'intensité de coloration, tu en déduiras la plus ou moins forte homologie et de là si le gène est présent ou pas chez ces espèces.

Il ya plein d'autres façons...la bio mol c'est vaste!

A+.

[inviteb753ced1]

Bonjour,

b) On souhaite savoir si ce gène est present chez un angiosperme et chez les oiseaux. quelles experiences realiserez vous? donner les conditions experimentales"

Tu copies-colles la séquence dans BLAST....
C'est pourtant facile, non ?

[invite1eba5460]

Merci pour ta réponse j'y vois plus claire maintenant

Par contre j'ai encore un soucis avec une question
"Le gène A subit un épissage alternatif dépendant du tissu dans lequel il s'exprime, décrivez une experience qui permet de mettre en evidence cet epissage alternatif"

Si quelqu'un à une idée?

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteb753ced1]

Par pcr avec des amorces adéquates sur une banque d'ADNc (puis séquençage et comparaison des clones amplifiés)

Par northern, avec une sonde marquée ciblant la partie non-splicée, révélant la présence du transcrit "par défaut", et le transcrit splicé (plus court, ou plus long)


Tschuussssssssssss

[invite1eba5460]

Ok merci pour vos réponses à tous c'est très sympas! la biologie moléculaire j'ai un peu du mal . Là j'ai lu pas mal de cours et j'ai trouvé un bouquin bien expliqué mais le problème c'est la pratique ... Les exos sur les techniques moléculaires corrigés j'en trouve pas beaucoup dans les livres à part beaucoup de qcm. Alors si vous connaissez un bon site d'exos corrigés ça m'aiderait bien (ou un bon bouquin) sur pcr, southern, clonage essenciellement.

[invite39343aba]

Alors si vous connaissez un bon site d'exos corrigés ça m'aiderait bien (ou un bon bouquin) sur pcr, southern, clonage essenciellement.

Bonjour!


Sans connaître leur contenu exact, il me semble qu'il y a plusieurs livres de l'édition Dunod (livres blancs avec une tranche verte) intitulés "Biologie moléculaire, problèmes résolus" ou encore "bio mol, aide mémoire" etc etc.

Tu devrais pouvoir y trouver ton bonheur.

Mumu

[invite1eba5460]

Merci pour ta réponse mais je connaissais déjà le "biologie moléculaires, exercices corrigés" mais c'est un peu trop compliqué par rapport à ce que je fais

[invite7cfa4525]

bon je vous conseille de voir 2 livres "capelan" et celui de "jachline" ils m'ont aidé dans mon exposé sur le clonage ;c vrai vous allez trouvé que c un peu detaillé mais des fois le detail sert a éclairsir beaucoup de choses .bon courage