Utilisation spectrophotomètre Bradford

[Bacp]

Bonjour à tous,
Pour un projet que nous avons en biologie cette année, nous devons évaluer la teneur en protéines de différents aliments. Celle qui nous est venu le plus souvent dans nos recherches et la méthode de Bradford.
Nous avons essayé aujourd’hui de faire nos expériences mais la courbe ne passe pas par l’origine du repère (celle avec l’albumine bovine).
Ma question est donc la suivante : est-ce qu’il faut faire le blanc du spéctro avec une cuve de 3,1ml d’eau distillée ? Ou alors faire le blanc avec une cuve contenant 3ml de bleu de coomassie avec 0,1 ml d’eau distillée? ?
Merci beaucoup pour votre réponse !
-----

[Flyingbike]

ça dépend, il y a plusieurs façons de procéder.
Si vos standards sont dilués dans l'eau, alors le point de concentration zero est obtenu en mettant le bleu + de l'eau. Cela vous donnera une absorbance qui ne sera évidemment pas nulle, et donc une courbe qui ne passera pas par l'origine.

A partir de là, il y a deux solutions :
1- faire un "blanc" avec le standard de concentration zero, dans ce cas là le point de concentration zero sera à environ zéro d'absorbance
2- faire vos mesures avec un blanc obtenu avec de l'eau, et soustraire à postériori à toutes vos valeurs la valeur d'absorbance du standard de concentration zéro.

Dans les deux cas, cela revient au même, cependant j'ai une préférence pour la solution 2 car il n'y a pas de perte d'information.