Répondre à la discussion
Affichage des résultats 1 à 8 sur 8

Déchiffrage d'une carte de plasmide



  1. #1
    nicozzie

    Déchiffrage d'une carte de plasmide

    Bonjour a tous,

    Je tente de dechiffrer la carte d'un plasmide,
    c'est a dire comprendre les fonctions des differentes parties du plasmide.
    Pour info il s'agit de ce plasmide : pcdna3.1+.
    Je bute en particuler sur le Signal de polyadénylation du SV40.
    Quel est son role ?

    Merci d'avance.
    Amities d'Australie

    -----


  2. Publicité
  3. #2
    Vinc

    Re : Dechiffrage d'une carte de plasmide

    Salut!
    Les 2 lignes au dessus du plasmide correspondent aux différents sites de restrictions (éventuellement pour cloner une séquence dans ces poly-linker).
    La séquence de polyadénylation BGH est située juste derrière les sites de restriction ce qui permettra à ta séquence insérée de recevoir une queue polyA et tu obtiendra un ARNm fonctionnel (=traductible en protéine).
    Juste avant les sites de restriction tu as bien sûr un promoteur pour initier la transcription de ta séquence (Pcmv). Les séquences Ori sont les origines de réplication du plasmide.
    Tu as enfin deux cassettes de résistance, une à l'ampicilline et l'autre à la néomycine, pour les sélections.
    La séquence de polyA du SV40 est peut-être nescessaire pour que la polyadénylation ait bien lieu dans certains organismes, la première séquence BGH reste peut-être spécifique, mais ça n'est qu'une supposition.
    A+
    Vinc
    Primum non nocere.

  4. #3
    nicozzie

    Re : Déchiffrage d'une carte de plasmide

    Bonjour,
    et merci pour cette reponse complete.

    A present je me demande juste comment les plasmides recombines vont pouvoir etre selectionnes :
    en effet, j'ai bien deux genes de resistance a des antibiotiques, mais mon polylinker n'est pas sur un de ces genes, comme c'est habituellement le cas.
    Quelqu'un a-t-il une idee ?

    Merci,
    Nico.

  5. #4
    Vinc

    Re : Déchiffrage d'une carte de plasmide

    Salut!
    Ce n'est pas très grâve, ca veut juste dire que tu considères que chaque clone obtenu sur milieu sélectif aura un plasmide avec insert (ce qui n'est évidemment pas forcément le cas). Donc à toi ensuite de valider chaque clone par PCR en amplifiant le polylinker et en sélectionnant les clones qui ont une bande de la taille de ton insert (plus les borne du ploy linker en fonction des sites d'hybridation des primers). Tu fais des répliques sur colonie ou alors tu les numérotes précisemment de manière à savoir après la PCR quel clone possède l'insert et quel clone ne l'a pas.

    A+
    Vinc
    Primum non nocere.

  6. #5
    piwi

    Re : Déchiffrage d'une carte de plasmide

    personnellement bonne vielle methode:
    piquer une colonie
    tremper le cure dent (qui etait propre) dans le tube avec le mix pcr puis le laisser dans un tube avec du LB + antibio de selection en vu d'une miniprep.
    faire la pcr avec un hotstart de 15 mins à 94° pour faire exploser les bactos.
    Je fais fais ca sur 15 clones et en principe, j'en ai toujours un de bon au final.

    Je ne poursuis le clonage qu'avec avec les bons clones.

    Cordialement,
    piwi

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    nicozzie

    Re : Déchiffrage d'une carte de plasmide

    Bonjour et merci pour ces precisions,

    j'en ai encore une a vous demander ( c'est un peu question pour un champion ici )
    Quelle est la difference entre les promoteurs "pUC" et "f1 ori" ??


  9. Publicité
  10. #7
    mantOs

    Re : Déchiffrage d'une carte de plasmide

    Citation Envoyé par nicozzie Voir le message
    Quelle est la difference entre les promoteurs "pUC" et "f1 ori" ??



    Salut, à moins que je me trompe mais les cassettes "pUC ori" et "f1 ori" ne sont pas des promoteurs mais des origines de replication.
    Ton promoteur ici c'est celui du virus CMV .
    Desole pour l'absence d'accentuation, je suis sur clavier QWERTY.

  11. #8
    Fabian

    Re : Déchiffrage d'une carte de plasmide

    Citation Envoyé par mantOs Voir le message
    Salut, à moins que je me trompe mais les cassettes "pUC ori" et "f1 ori" ne sont pas des promoteurs mais des origines de replication.
    Ton promoteur ici c'est celui du virus CMV .
    Bonjour,

    En effet, pUC ori et f1 ori sont bien des origines de réplication et non des promoteurs. pUC ori est une origine de réplication procaryote tandis que f1 ori est l'origine de réplication spécifique au phage M13 monobrin. Ce dernier est notamment utilisé pour faire du séquençage ou de la mutagenèse dirigée.

    Cordialement.

Sur le même thème :

Discussions similaires

  1. Jeu de déchiffrage de messages codés
    Par codegame dans le forum Science ludique : la science en s'amusant
    Réponses: 52
    Dernier message: 15/09/2007, 14h23
  2. carte de plasmide
    Par vanessa25 dans le forum Biologie
    Réponses: 10
    Dernier message: 21/08/2006, 16h08
  3. routage d'une carte
    Par julienM dans le forum Électronique
    Réponses: 3
    Dernier message: 26/05/2006, 15h12
  4. Déchiffrage des règles Assedic
    Par eloze dans le forum Dépannage
    Réponses: 0
    Dernier message: 21/03/2006, 10h09
  5. Réalisatio d'une carte électronique
    Par dj hasttre dans le forum Électronique
    Réponses: 11
    Dernier message: 02/02/2006, 17h01