Concentrer de l'ADN

[joana]

Bonjour,

Voici mon problème :
Je travaille avec un liquide très peu concentré en ADN (moins de 2 ng/µL d'ADN), comment puis-je faire pour concentrer mon ADN et ainsi le visualiser sur gel d'agarose ?

Merci d'avance pour vos propositions.
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[Flyingbike]

La méthode la plus classique est la précipitation à l’acétate de sodium/ethanol (protocole facile à trouver)

Mais avec un bon système, vous devriez pouvoir déposer suffisamment pour que ce soit visible
(Ex 15 uL, ça fait 30ng. On considère que 10ng est le minimum visible en bromure d’ethidium)

Cela dit, c’est valable sur un profil d’ADN à bande unique. Si vous avez cette concentration pour un ensemble de molécules de tailles variables, vous ne verrez rien
Alors question importante : quel est cet échantillon, d’où vient t’il et que voulez vous voir ?

[Flyingbike]

Message déplacé en biologie

[joana]

Merci pour votre réponse.

J'ai effectivement réalisé une précipitation à l'acétate de sodium et isopropanol, puis j'ai utilisé un kit d'extraction : kit DNeasy powerWater de QUIAGEN.
Que pensez-vous du kit ? Est-il adapté ou avez-vous des recommandations ?
Ce sont des échantillons de vin,champagne, vinaigre et jus de raisin. Je veux visualiser de l'ADN de vigne.

[A voir en vidéo sur Futura]

[Flyingbike]

Les kits qiagen sont excellents du moment qu’on les utilise dans leur domaine de prédilection et qu’on applique le protocole.

Donc vous voulez visualiser de l’Adn génomique de vigne.

Je n’ai jamais fait la manip mais cela me semble impossible. Il y a probablement de l’ADN mais sous forme de chromosomes, de tailles variées, avec probablement des contaminants type ADN de levure.
L’ADN natif, à fortiori sous formes de chromosomes de très grandes taille, ne sont pas observables en electrophorese classique. Il faut des conditions spéciales du genre electrophorese pulsée, assez spécifique. Ou alors si on recherche une séquence en particulier; on passe par une étape d’amplification plus ou moins ciblée.

Quel est le but final de la manip ?