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perte d'un signal en hplc



  1. #1
    didy

    Question perte d'un signal en hplc


    ------

    Bonjour,voilà je travaille actuellement sur la mise au point d'un dosage d'une nouvelle substance par HPLC.Le problème est que au fur et à mesure des injections du produit on a une perte progressive du sigal.
    J'utilise un détecteur Uv visible...
    Je voudrais savoir si quelqu'un avait déjà eu ce problème et si oui les stratégies employées pour le contourner.
    Merci

    -----

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  4. #2
    mach3
    Modérateur

    Re : pert d'un signal en hplc

    à mon avis tu es en train de pourrir ta colonne tout simplement...

    m@ch3
    Never feed the troll after midnight!

  5. #3
    didy

    Re : pert d'un signal en hplc

    je ne comprends pas ta réponse.quand j'injecte de l'acide barbiturique dans les mêmes conditions j'ai un coefficient de variation <à 3%...et ce après avoir testé mon produit...Non je cherche vraiment une solution s'il en existe une ou des références bibliographiques....ppplease!! !

  6. #4
    mach3
    Modérateur

    Re : pert d'un signal en hplc

    ce que je voulais dire c'est que si au fur et a mesure de tes injections, que j'espere repetables, si il y en a de moins en moins qui sort, c'est que c'est resté dans la colonne, et donc tu es en train de pourrir la colonne. ou alors je n'ai pas compris ce que tu voulais dire par :

    au fur et à mesure des injections du produit on a une perte progressive du sigal.
    m@ch3
    Never feed the troll after midnight!

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  8. #5
    shaddock91

    Re : pert d'un signal en hplc

    Bonjour

    Ta solution n'est peut-être pas stable dans le temps (décomposition, précipitation partielle...).

  9. #6
    didy

    Re : pert d'un signal en hplc

    effectivement on y a pensé(je suis dans un labo de biopharmacie et technique hospitalières)....merci m@ch3
    et pour répondre à ta proposition shaddock,ma solution est stable(on a vérifié au spectro et toujours le même profil...);et est ce que quelqu'un connaitrait un autre moyen d'effectuer une mise au point de dosage assez fine à part l'hplc?sachant que c'est pour ensuite effectuer des dosages biologiques à partir de sérums animaux....Merci!

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  11. #7
    Fajan

    Re : pert d'un signal en hplc

    la solution est stable : oui.

    Mais est elle stable en présence de la phase de ta colonne?

  12. #8
    gil_grissom

    Re : perte d'un signal en hplc

    Si j'ai bien compris, la solution est stable, et ta colonne est toujours ok avec ton test à l'acide barbi.
    Tu injectes des solutions pures ou dans une matrice quelconque ?
    Je vois deux hypothèses :
    - soit ton composé reste dans la colonne comme déjà dit
    - soit tu as un effet matrice que tu ne peux voir avec ton test
    difficile aussi de diagnostiquer sans connaitre les conditions d'analyse et la molécule.

  13. #9
    didy

    Re : perte d'un signal en hplc

    merci vraiment à tous!
    et c'est vai Fajan,je n'ai pas essayer de vérifier la stabilité de mon produit dans ma phase mobile,so thanks je vais le faire.
    pour répondre à gil,j'injecte mon produit dilué dans de l'eau.et ma phase est composée d'H3PO4 et ACN à ph 2 à peu près.voilà!et encore merci de partager vos idées avec moi!!!

  14. #10
    didy

    Re : pert d'un signal en hplc

    merci vraiment à tous!
    et c'est vai Fajan,je n'ai pas essayer de vérifier la stabilité de mon produit dans ma phase mobile,so thanks je vais le faire.
    pour répondre à gil,j'injecte mon produit dilué dans de l'eau.et ma phase est composée d'H3PO4 et ACN à ph 2 à peu près.voilà!et encore merci de partager vos idées avec moi!!!

  15. #11
    didy

    Re : perte d'un signal en hplc

    merci vraiment à tous!
    et c'est vai Fajan,je n'ai pas essayer de vérifier la stabilité de mon produit dans ma phase mobile,so thanks je vais le faire.
    pour répondre à gil,j'injecte mon produit dilué dans de l'eau.et ma phase est composée d'H3PO4 et ACN à ph 2 à peu près.voilà!et encore merci de partager vos idées avec moi!!!

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