Demande aide pour analyse HPLC

[invited299d994]

bonjour à tous,

je vous expose mon soucis, sachant qu'a la base je n'ai pas de formation en science et analyse, j'ai été sollicité pour un stage en laboratoire pharmaceutique.
le but qualifier des chiffonnettes de façon à avoir une réponse quantifiable et répetable entrant dans les spéc,déterminer un taux de recouvrement tout en diminuant la masse de produit recherché au fur et à mesure.
je constate les différences d'aires, comprends les différentes dilutions, le temps de retention, mais je ne sais pas analysés les différences entre chaque dilution

par exemple :
les spéc sont entre 47,5 et 52,5g/100g
ma masse 0.0125g dans une solution 25%acétonitrile et 75% d'eau dans 200ml
la matière premières est essuyée par une chiffonnette de 15/15cm
puis on pratique une dilution au 1/50
les résultats sont:
aire: 30370
dosage :62.5g/100g
n'entrant pas dans les spéc je pratique une autre dilution à partir de la même solution mère les résultats sont totalement différents:
aire 17359
doasge 35.6g/100g

autre exemple :
même spec que la précédente
même masse dans la même solution mais dans 100 ml
la chiffonnette est de 10/10cm
plus une dilution au 1/100 ce qui revient à dire que c'est excatement la même concentration que la précédente expérience.
les résultats sont :
aire de 18173
dosage : 38.9g/100g

je pratique une autre dilution a partir de la même solution mère les résultats sont encore inversés.
aire:21356
dosage :45.7g/100g

Ma question est pourquoi j'ai ces résultats?????
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[invite9b06c290]

Je ne comprends pas tout...

Quid de ta calibration ?
Quelle est la concentration (ou l'aire) de ton échantillon de calibration ?

Si tu es trop éloigné, la proportionalité de la réponse n'est plus assurée et tu tombes sur des résultats aberrants.

[invited299d994]

si je comprend bien pour toi "la calibration" correspond à l'injection de référence sur lequel est basé la comparaison


voilà le mode OP standard

Solution témoin acide acétylsalycilique standard

Prise d'essai 200 mg
Solvant d'extraction n°1 25 ml d'acétonitrile
Temps d'agitation 10 min
Solvant d'extraction n°2 compléter à 100 ml d'eau
Temps d'agitation 10 min
Dilution 1/50
Solvant de dilution acétonitrile/ eau (25/75)
masse réelle pesée 0.2001 g
la concentration est 4.10-4 g/L
le pic que que j'obtiens a une aire de 1528174.5
peut-etre ces indications pourront t'aidé

merci.

[invite9b06c290]

C'est effecvitement de cela que je te parlais.

Le pic de référence a un aire de l'ordre du million quand les pics de tes analyses sont plutôt dans la dizaine de millier.

A priori, tu n'as aucune proportionalité car tu es en dehors du domaine linéaire de ta méthode.

En général, l'échantillon de référence doit avoir une concentrtion proche (+ ou - 25 %) de celle de tes échantillons.

Sinon, il faut faire une courbe de calibration couvrant une grande gamme de concentrations.

[A voir en vidéo sur Futura]