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Demande aide pour analyse HPLC



  1. #1
    KWEINTEN

    Question Demande aide pour analyse HPLC


    ------

    bonjour à tous,

    je vous expose mon soucis, sachant qu'a la base je n'ai pas de formation en science et analyse, j'ai été sollicité pour un stage en laboratoire pharmaceutique.
    le but qualifier des chiffonnettes de façon à avoir une réponse quantifiable et répetable entrant dans les spéc,déterminer un taux de recouvrement tout en diminuant la masse de produit recherché au fur et à mesure.
    je constate les différences d'aires, comprends les différentes dilutions, le temps de retention, mais je ne sais pas analysés les différences entre chaque dilution

    par exemple :
    les spéc sont entre 47,5 et 52,5g/100g
    ma masse 0.0125g dans une solution 25%acétonitrile et 75% d'eau dans 200ml
    la matière premières est essuyée par une chiffonnette de 15/15cm
    puis on pratique une dilution au 1/50
    les résultats sont:
    aire: 30370
    dosage :62.5g/100g
    n'entrant pas dans les spéc je pratique une autre dilution à partir de la même solution mère les résultats sont totalement différents:
    aire 17359
    doasge 35.6g/100g

    autre exemple :
    même spec que la précédente
    même masse dans la même solution mais dans 100 ml
    la chiffonnette est de 10/10cm
    plus une dilution au 1/100 ce qui revient à dire que c'est excatement la même concentration que la précédente expérience.
    les résultats sont :
    aire de 18173
    dosage : 38.9g/100g

    je pratique une autre dilution a partir de la même solution mère les résultats sont encore inversés.
    aire:21356
    dosage :45.7g/100g

    Ma question est pourquoi j'ai ces résultats?????

    -----

  2. #2
    jgiovan

    Re : Demande aide pour analyse HPLC

    Je ne comprends pas tout...

    Quid de ta calibration ?
    Quelle est la concentration (ou l'aire) de ton échantillon de calibration ?

    Si tu es trop éloigné, la proportionalité de la réponse n'est plus assurée et tu tombes sur des résultats aberrants.

  3. #3
    KWEINTEN

    Re : Demande aide pour analyse HPLC

    si je comprend bien pour toi "la calibration" correspond à l'injection de référence sur lequel est basé la comparaison


    voilà le mode OP standard

    Solution témoin acide acétylsalycilique standard

    Prise d'essai 200 mg
    Solvant d'extraction n°1 25 ml d'acétonitrile
    Temps d'agitation 10 min
    Solvant d'extraction n°2 compléter à 100 ml d'eau
    Temps d'agitation 10 min
    Dilution 1/50
    Solvant de dilution acétonitrile/ eau (25/75)
    masse réelle pesée 0.2001 g
    la concentration est 4.10-4 g/L
    le pic que que j'obtiens a une aire de 1528174.5
    peut-etre ces indications pourront t'aidé

    merci.

  4. #4
    jgiovan

    Re : Demande aide pour analyse HPLC

    C'est effecvitement de cela que je te parlais.

    Le pic de référence a un aire de l'ordre du million quand les pics de tes analyses sont plutôt dans la dizaine de millier.

    A priori, tu n'as aucune proportionalité car tu es en dehors du domaine linéaire de ta méthode.

    En général, l'échantillon de référence doit avoir une concentrtion proche (+ ou - 25 %) de celle de tes échantillons.

    Sinon, il faut faire une courbe de calibration couvrant une grande gamme de concentrations.

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