analyse HPLC

[invited1061610]

pour l'analyse par HPLC du glucose, on a réalisé un étalon de glucose (10 g de glucose dans 1 litre d'eau). La phase mobile utilisée était un mélange d'acétonitrile (80%) et d'eau (20%), mélange peu polaire. La phase stationnaire était un liquide semi polaire (mais quand même plus polaire qu'apolaire) greffé en NH2.
Théoriquement, le premier pic qui devrait sortir correspondrait au soluté le moins polaire, soit le glucose (moins polaire que l'eau)
Le problème c'est que le premier pic qui est sorti correspond (selon la prof) à l'eau contenue dans l'étalon de glucose. Pourquoi l'eau (très polaire) sort elle en premier alors qu'elle devrait théoriquement sortir en dernier (comme elle est polaire elle devrait être retenue par la phase stationnaire)??????
Merci
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[moco]

Il y a quelque chose d'absolument aberrant dans ton roman.
Si la phase mobile est un mélange d'acétonitrile et d'eau, il y a une chose qu'on ne devrait pas voir, c'est un pic de l'eau. Il ne peut pas non plus y avoir de pic de l'acétonitrile, puisque ces deux substances sont les constiutuants de la phase mobile.
Si tu injectes du glucose dans ton appareil, tu dois obtenir un pic et un seul, le glucose. Si tu obtiens un deuxième pic, c'est une impureté. Mais cette impureté ne eut être ni de l'eau ni de l'acétonitrile.
Moi j'aurais une autre suggestion. Estce que tes deux pics ne seraient pas pasr hasard, l'un le alpha-glucose, et l'autre le béta-glucose. L'alpha-glucose est stable à l'état sec, et le béta-glucose est stable en solution.

Dernière remarque. Tu dis que le mélange eau-acétonitrile n'est pas polaire. C'est la meilleure ! Elle est bien bonne, celle-là. Qu'est-ce qu'il te faut pour rendre une substance polaire ?

[invited1061610]

j'ai pas dit qu'elle n'était pas polaire, j'ai dit qu'elle était peu polaire : elle contient peu d'eau (20%) et beaucoup d'acétonitrile (80%). L'acétonitrile serait donc polaire?!? En fait c'est la prof qui nous a dit ça, mais vu qu'elle n'est pas capable de m'expliquer ce que c'est que ce pic je ne suis pas sure qu'elle au point!!!
Selon toi, on ne devrait pas voir de pic pour l'eau, mais je pense qu'on devrait le voir quand même, vu qu'elle est en faible quantité dans la phase mobile (20%) et que c'est le seul solvant utilisé pour l'étalon de glucose. De plus, j'ai oublié de préciser que le détecteur est un réfracto, donc normalement on doit voir un pic pour l'eau, qui n'apparaitraît pas si le détecteur était un spectro.
Pour ta suggestion de la présence d'alpha glucose et bêta glucose, je suis sceptique. En fait, on a fait le suivi fermentaire d'une levure dans un bouillon glucosé. Logiquement, les deux pics correspondant à l'alpha glucose et bêta glucose devraient rapetisser en même temps. Mais là il n'y en a qu'un sur les deux qui diminue. A moins que la bactérie utilise préférentiellement l'un ou l'autre des 2 glucoses.
Merci beaucoup

[invitea724b912]

avec un refractometre normalement ça doit etre possible de voir un pic d'eau corespondant à l'etalon.
Le signal est calibré à zero pour 20% d'eau mais si on augmente la quantité d'eau l'indice de refraction change et on a donc un signal.

Je pense que ta phase stationnaire est plutot apolaire car tu travail avec un phase mobile de type polaire c'est la polarité de phase inverse.
En polarité de phase normale tu travail sur une phase stationnaire de type polaire (silice...) avac une phase mobile apolaire (alcane + solvant organique polaire)

Donc ici l'eau etant plus polaire que le glucose elle n'a pas d'affinité avec la phase stationnaire ou tres peu et sort donc en premier.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invited1061610]

OK! Merci beaucoup