Purification de beta lactamases

[invite42d02bd0]

Bonjour, je dois purifier des beta lactamases issu d'une lyse de cellule, par colonne de nickel.

Mais j'ai deux trois questions

On prépare des tampons phosphates (Na2HPO4 / NaH2PO4) en ajoutant du NaCl 0.5M afin d'avoir un pH de 7.4

Le sel est il ajouté uniquement pour réguler la force ionique et avoir une activité exacte en H+ pour avoir un pH de 7.4? ou bien le sel a t il une autre utilité?

Avant de congeler mes échantillons de beta lactamases, on me dit de les mélanger dans quelques microlitre d'un mélange glycerol/eau 87/13; mais quel est l'intéret de faire cela?

Merci beaucoup

Fajan
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[invitec9f0f895]

Bonjour,

Oui je pense que le NaCl est la pour la force ionique afin de limiter les ineractions aspecifiques.
J'imagine que tes beta-lactamases sont taggées avec un His6 pour etre purifiées sur Nickel non?
Sinon le glycérol a un role cryoprotecteur, afin d'eviter la dénaturation des proteine lors de la congelation. A forte concentration de glycerol, l'echantillon ne gèle pas, a plus faible concentration il me semble que le glycerole evite la formation des cristaux de glace durant cette congélation.

Yoyo

[invite42d02bd0]

ha oui, merci beaucoup