Etalonnage interne

[invite26f5128d]

Bonjour,
Dans le cas d'une quantifiacation par étalonnage interne en CPG, le volume injecté pour la calibration et pour l'analyse doit être le même? peut-être le même?

Merci d'avance de votre aide.
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[invite2313209787891133]

Bonjour Gluby

Il est impossible d'injecter le même volume d'une mesure à l'autre; le volume indiqué sur la seringue est une grosse approximation. On s'en rend facilement compte en comparant l'aire totale du chromatogramme.

En théorie le volume injecté ne devrait pas modifier la quantification, mais dans la pratique on se rend compte qu'un petit volume amène souvent des resultats incoherents; d'une part parce que le rapport signal/bruit vas changer, et provoquer plus d'incertitudes, d'autre part parce que la réponse du detecteur n'est pas tout à fait linéaire (c'est d'ailleurs pour cette raison que "l'étalonage" doit se faire en plusieurs points).

[invite665a0d0b]

Bonjour
C'est, entre autre, parce que le volume injecté ne peut être le même, que l'on ajoute un étalon interne à la solution à analyser et à l'échantillon pour corriger par calcul les modifications de surface et de hauteur des pics chromatographiques.
cordialement
rls

[invitec2cb4f34]

Pour des systèmes équipés de passeurs automatiques les variations sont assez minimes, il est aussi possible d'utiliser une boucle d'injection mais il faut que l'echantillons sont déja sous phase gaz.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite2313209787891133]

Même avec un passeur les variations sont importantes, je dirais à vue de nez de l'ordre de 20/30% du volume. Les graduations de la seringue ne sont qu'une grossière indication.

[invitec2cb4f34]

Avec le passeur head space avec lequel je travail actuellement j'ai moins de 5% de vraiation mais bon c'est un cas un peu particulié.

sur un passeur classique à volume reglable, sur une GC (ou une HPLC), même si la valeur numérique du volume d'injection est à prendre avec des pincettes le volume injecté est quasiment toujours le même.

[invite2313209787891133]

J'ai 3 CPG chez moi (je m'etais amusé à passer des CPG sur de la mirabelle, de la vodka et du calvados), et quand je regarde l'aire du pic de standard interne j'ai 3025, 2889 et 2554 µV.min. Bien sur les méthodes sont les mêmes (même quantité de standard, même programme etc, avec passeur Varian).

Je ne sais pas quelle est ta definition de "quasiment toujours le même", mais ça ne doit pas être la même pour moi.

[invitec2cb4f34]

Voila quelques résulats :

Head-space GC-ECD (passeur Dani HSS + varian 3400 avec)
[CHCl3]=1.23e-7 : A=304,53-310,82-313,71-297,29-305,74mV.min
donc bonne repetabilité

Pour un systeme passeur agilent (je me rapel plus la ref) + GC Agilent 5890 série II + spectromasse (GC-MS 5972) : Les résulats sont en effet très variable et je travaillai en effet avec un intalon interne (ou en relatif par rapport à l'aire totale des pics identifés).
Ex pour un standard Me. trans-9-octadecanoate [181(9)] à 15ng après extraction et dérivation j'ai A=123269 ; 101811 ; 137525

Pour une chaine HPLC waters j'ai :
[Resorcinol]=1e-4M Vinj=10µL : 1096194 (I) ; 1092456 (I) ; 1153465 (II)
[Resorcinol]=1e-5M Vinj=100µL : 111598 (II)

I et II car pas fait en même temps.