HPLC (Phase mobile)

[invite61942757]

Bonjour, je suis entrain d'analyser une molécule acide par HPLC et j'ai lu dans un article que la phase mobile utilisée pour cet analyse est 60/40 ACN/eau acidifée .
A quoi sert l'acidification ?
Merci .
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[moco]

C'est une simple recette, qui a probablement été trouvée par tâtonnements, de manière empirique. On aurait sans doute de la peine à le justifier par un raisonnement.

[mach3]

surement pour garder ton acide protonné.

Un acide qui se déprotonne trop en HPLC donne souvent des trainées de pics ennuyeuses (surtout quand elles durent 1h...), la présence d'un autre acide limite ou empêche ce phénomène. Mais bon je ne suis pas sûr que ce soit une généralité, cela peut dépendre de la colonne aussi (si la phase stationnaire à le malheur d'avoir des groupements un peu basique ça sera le cas).

En tout cas j'ai observé l'effet personnellement sur un acide en chro chirale, élué en hexane/IPA on avait des trainées monstrueuses et avec seulement 0,1% d'acide trifluoroacétique dans l'hexane les trainées ont disparu.

m@ch3

[JPL]

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[invite9b06c290]

Bonjour,

Il est de bonne pratique en HPLC phase inverse d'acidifier la phase aqueuse.
Ca permet de protoner les composés acides et d'éviter le "tailing", comme cela a été indiqué.

Ca permet également de protoner les silanols libres (non fonctionalisés) et d'éviter un phénomène d'échange d'ion concurrent de la séparation par phase inverse. Ca permet d'améliorer la reproducibilité des analyses indépendamment de la colonne utillisée (le taux de fonctionnalisation peut légèrement varier d'un lot à l'autre).