dosage amino acide par HPLC

[invite6eea33a5]

Bonjour ,

Je cherche une méthode par HPLC pour analyser les amino acides sans avoir à derivatiser (OPA ou FMOC). Est ce que quelqu'un a deja fait cela ou quelquechose de similaire ?

Merci d'avance,
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[inviteb7fede84]

Bonjour

En utilisant une colonne chargée en phase inverse, il n'y a pas besoin de dérivatiser.

[invite6eea33a5]

Merci pour cette info. Quand tu dis "chargé" en phase inverse tu veux dire une colonne type RP 18 par exemple ? J'ai vu en effet une application sur le net mais il ont un détecteur évaporatif à diffusion de lumière derrière et moi je n'ai qu'un détecteur UV/Vis penses tu que je verrai quand même quelque chose ?
Saurais tu par hasard quelle phase mobile utiliser ? Quelles sont les règles à respecter pour le choix de la phase mobile ? Quelle est la logique a respecter quand on choisi une phase mobile en HPLC ?

[inviteb7fede84]

Bonjour
Effectivement la RP18 est la silice de base. En ce qui concerne la détection il faut que ton spectro soit performant, sinon tu ne verras pas les aminoacides aliphatiques . Il faut faire des essais, sachant qu'un détecteur UV sature vite (2 DO).

Quant à la phase mobile, il faut utiliser un mélange polaire pour des composés non polaires et inversement.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite882b13dc]

salut,

Il me semble que sur le site de Supelco (groupe Sigma-Aldrich), il y a pas mal d'applications en ligne qui pourront te donner des idées d'éluant, de phase et de détecteur.

Cela dit, je suis d'ac avec Shaddock, avec un det UV-Vis, si t'as pas d'aromatique, ça va être compliqué

[invitea724b912]

Bonjour
Effectivement la RP18 est la silice de base...

Silice de base greffé avec des chaines alkyles, c'est pas de la silice vierge!

[invite6eea33a5]

merci a tous pour toutes ces precieuses informations je vais aller voir sur le site de supelco de suite

[invite69345417]

Bonjour à tous,

Je suis etudiante et je dois réaliser un dossier sur un protocole d'analyse par HPLC. Celui-ci doit contenir evidemment le protocole, une critique de celui-ci, justification de la methode,...

Dans ce forum, vous parlez d'une analyse d'amino acide. Pourriez-vous me fournir le protocole, svp?

Merci à vous

[invitec2cb4f34]

Moi j'utilise une technique par appariement d'ion sur une colonne C18 pour doser des amines et autres composés azotés inorganiques. J'ai une très bonne résolution et des temps de rt relativement courts. Cette methode doit être transposable pour les AA.

col :C18 zorbax
Eluant phase aqueuse : tetrabutylammoniumhydrogénosul fate + tampon phosphate ; pH = 6

[invite9b06c290]

Bonjour,

D'expérience, sans dérivatisation, la détection UV n'est pas appropriée aux aminoacides.

Le top actuel de la technologie, c'est la détection CLND, spécifique de l'azote.
Les détecteurs non-spécifiques type ELSD ou Corona CAD donnent également des résultats.

Les détecteurs à dichroisme circulaire sont également utilisables. Ils permettent en outre de discriminer les L-aminoacides des D.