chromatographie hlpc détecteur uv

[invitefd0d8d77]

Bonjour,

En tp j'ai injecté en chromato hplc plusieurs carbonyles pour connaitre leur temps de rétention, puis ensuite j'ai injecté un échantillon contenant plusieurs de ces carbonyles, j'ai reussi à les identifier par leur temps de rétention, mais je dois aussi déterminer leur concentration...
j'ai obtenu des chromatogrammes donnant des V en fonction du temps de rétention, et j'ai noté l'aire sous les pics.

j'aimerai savoir comment calculer la concentration de chacun des produits qu'on a injecté à partir de l'aire sous la courbe obtenu ?
Merci beaucoup de vos réponses.

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[jgiovan]

salut,

l'aire des pics est proportionnelle à la concentration en g/l de tes carbonyles dans la solution injectée.

Si tu dispose de la concentration de chaque carbonyle dans la solution de référence, une simple règle de trois te permettra de calculer leur concentration dans ton échantillon.

[HarleyApril]

Bonjour et bienvenue sur le forum
Deux méthodes pour faire ton calcul, la première est plus exacte que la seconde
première méthode
Lorsque tu as injecté chacun de tes carbonyles, tu as injecté une quantité donnée et tu mesures une aire. Tu peux donc, inversement, en mesurant une aire, remonter à la quantité en faisant une règle de trois (ou règle du gamma)
la concentration d'un produit sera alors cette quantité divisée par la somme des quantités

deuxième méthode
tu fais l'hypothèse que tous les produits ont le même facteur de réponse
tu fais la somme des aires des pics de tous les carbonylés
pour chaque pic, tu divises l'aire du pic par la somme
tu auras ainsi la proportion de chaque constituant

ces proportions sont des proportions molaires, bien évidemment, si ce sont des proportions massiques dont tu as besoin, il te faudra corriger avec les masses molaires

cordialement

[EDIT grillé par jgiovan]

[invitefd0d8d77]

Merci pour ces réponses,
je vais apporter quelques précisions,
pour jgiovan : pour les carbonyles de référence j'ai injectée avec des seringues de 200µl un produit mais sans connaitre la quantité exacte, ou la concentration, c'était une goutte de chacun des produits dans 10 ml de solvant.

pour HarleyApril : je vais essayer ce soir de calculer avec la méthode des proportions mais je n'ai pas pu identifier tous les pics. Certain ne correspondant à aucun des carbonyles que j'ai en reference. Je pense que je dois quand meme en tenir compte dans les proportions, n'est ce pas ?
Merci

[A voir en vidéo sur Futura]

[shaddock91]

salut,

l'aire des pics est proportionnelle à la concentration en g/l de tes carbonyles dans la solution injectée.

Si tu dispose de la concentration de chaque carbonyle dans la solution de référence, une simple règle de trois te permettra de calculer leur concentration dans ton échantillon.

Bonjour
Donc si tu ne connais pas les concentrations de tes solutions mères de "carbonyle", impossible de t'en tirer.

[HarleyApril]

si !
en admettant que les facteurs de réponses sont voisins
on peut espérer que celui qui a conçu le TP a pris soin de prendre des composés de structures voisines

pour les proportions, que tu prennes les autres pics ou non ne changera pas les proportions, mais t'allongera les calculs
je m'explique
imaginons que tu aies deux produits avec des aires 50 et 30 et un contaminant avec une aire de 20

je prends toutes les aires
la somme fait 100
le premier fait 0,5 et le second 0,3
la proportion est de 0,5 pour 0,3
en normant par exemple à 100% ça fait 62,5% et 37,5%

je ne prends que les pics concernés
la somme fait 80
les proportions sont 50/80=0,625=62,5% et 30/80=0,375=37,5%

et voilou, une démonstration par l'exemple (merci de ne pas cafter en maths )

cordialement

[invitefd0d8d77]

Ce sont tous des carbonyles, formaldéhyde, puis acétaldéhyde, puis propanal, etc...
Merci pour les proportions, j'avance grace à vous

[shaddock91]

si !
en admettant que les facteurs de réponses sont voisins
on peut espérer que celui qui a conçu le TP a pris soin de prendre des composés de structures voisines

pour les proportions, que tu prennes les autres pics ou non ne changera pas les proportions, mais t'allongera les calculs
je m'explique
imaginons que tu aies deux produits avec des aires 50 et 30 et un contaminant avec une aire de 20

je prends toutes les aires
la somme fait 100
le premier fait 0,5 et le second 0,3
la proportion est de 0,5 pour 0,3
en normant par exemple à 100% ça fait 62,5% et 37,5%

je ne prends que les pics concernés
la somme fait 80
les proportions sont 50/80=0,625=62,5% et 30/80=0,375=37,5%

et voilou, une démonstration par l'exemple (merci de ne pas cafter en maths )

cordialement

Bien d'accord avec toi Harley pour cette approximation. Mais ce n'est pas parce que les 3 molécules ont un carbonyle que leur absorption UV à la longueur d'onde utilisée pour la détection aura la même intensité. Le problème est qu'on ne connait pas la marge d'erreur de cette approximation. Ca donne une idée, c'est déjà ça.

Par contre si on a un spectro à barrette de diodes, c'est autre chose.

Cordialement

[invite2313209787891133]

Bonjour

L'idéal serait encore de comparer les facteurs de réponse en passant un mélange avec des proportions connues; les proportions sont choisies de façon à approcher ce que l'on veux doser (le détecteur n'est pas tout à fait linéaire).
Connaissant ces facteurs on peut alors multiplier chaque aire par ce facteur, et obtenir quelque chose de proche du pourcentage massique.

[invitefd0d8d77]

A propos de cas carbonyles, ils sont difficiles a voir en UV alors on leur fait une derivatisation au DNPH , c'est une sorte de condensation qui ajoute un chromophore.
on obtient des hydrazones (carbonyles + chromophore)qui auront, normalement le même facteur de réponse..
Donc si j'ai bien compris mon Tp la seule chose qui variera sera l'aire sous le pic qui depend de la concentration et le temps de rétention.....
merci de votre aide

[HarleyApril]

en effet, en faisant la dinitrophénylhydrazone, on doit avoir des facteurs de réponse très voisins
reste le problème de non-linéarité, mais ce n'est sans doute pas dans le sujet du TP

cordialement

[inviteb801c3e3]

bonjour tout le monde

en effet, je travaille sur le dosage de la betamethasone goutte par HPLC

étalon: dissoudre 50mg de betamethasone avec une solution à 1pour mille acide acetique glacial dans methanol et completer au volume de 50ml
diluer 5ml de cette solution avec le meme solvant au volume de 50ml

phase mobile: 70% eau - 30% acétonitrile

j'ai rien obtenu comme resultat et je n'arrive pas a interpreter

c'est quoi le probleme ??

[jgiovan]

bonjour tout le monde

en effet, je travaille sur le dosage de la betamethasone goutte par HPLC

étalon: dissoudre 50mg de betamethasone avec une solution à 1pour mille acide acetique glacial dans methanol et completer au volume de 50ml
diluer 5ml de cette solution avec le meme solvant au volume de 50ml

phase mobile: 70% eau - 30% acétonitrile

j'ai rien obtenu comme resultat et je n'arrive pas a interpreter

c'est quoi le probleme ??

Bonjour,

Ca signifie quoi "pas de resultat" ?
As-tu un pic chromato ou pas ?

Pour effectuer ton dosage il te faut disposer de betamethasone pure dont une feras une solution de concentration connue proche de la concentration attendue de ton échantillon. Il ne te reste plus qu'à comparer l'aire de ton pic de référence avec celle du pic de l'échantillon à doser...

[inviteb801c3e3]

bonjour

quand j'ai injecté l'étalon cité precedement j'ai obtenu plusieurs pics (7 à 8) mal séparés
pourqoui ?

[inviteb801c3e3]

bonjour tout le monde , j'attends toujours votre aide
je vais vous relancer ma question en détails ..

dosage de la betaméthasone par HPLC:

1- solution de référence
transférer 50mg de bétamethasone de référence exactement pesée dans une fiole de 50ml
dissoudre avec une solution a 1 pour mille acide acétique glacial dans méthanol et compléter au volume avec le même solvant , diluer 5ml de cette solution à 50ml avec le même solvant

résultat
j'ai obtenu des pics montagne mal séparés
puis j'ai essayé d'injecter que le methanol seul juste pour voir , je me suis surprise par le même pic

aider moi a interpréter ces résultats