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Chromatographie échangeuse d'ions



  1. #1
    Meningo

    Chromatographie échangeuse d'ions


    ------

    Bonjour,
    J'utilise une colonne echangeuse d'ion (en fibres de verre) pour extraire de l'ADN (chargé -) à partir de cellules. Les réactifs utilisés sont compris dans un kit commercialisé.
    Mon problème est que je ne comprends pas comment se fait l'élution. D'après mes vagues souvenirs, elle se fait soit par compétition avec un anion de plus forte affinité, ou par changement du pH. Dans le kit que j'utilise, ils insistent sur le fait que l'élution se fait grâce à un réactif très faiblement salé (en comparaison aux réactifs des étapes précédentes), et il s'avère que ce réactif est de l'eau faiblement salée, voire de l'eau tout court....comprends pas......
    Qu'en pensez-vous ?
    A moins que ce ne soit pas une colonne échangeuse d'ion (ça ne figure pas sur le kit)
    Merci.

    -----

  2. Publicité
  3. #2
    Meningo

    Re : Chromatographie échangeuse d'ions

    Ca n'inspire personne mon histoire ? :?

  4. #3
    stef

    Re : Chromatographie échangeuse d'ions

    ta colonne est peut etre recouverte d'un adsorbant qui capte les Na+ de l'eau salée pour ainsi polariser ta colonne en +.
    Ainsi l'ADN chargée moins sera retenue sur la colonne et pourra ainsi etre separé du reste.

    C'est juste un hypothese mais y a un truc un peu comme ça en electrophorese capillaire donc peut etre que ça se recoupe.
    Tout travail merite salaire, j'attends toujours!

  5. #4
    Meningo

    Re : Chromatographie échangeuse d'ions

    Ah, pas mal...
    Je vais jeter un oeil sur les électrophorèses capillaires pour voir si ça colle avec mes colonnes.
    Merci.

  6. A voir en vidéo sur Futura
  7. #5
    stef

    Re : Chromatographie échangeuse d'ions

    en fait j'ai dit absorbant mais c'est pas vraiment ça.
    En fait t'as une colonne en faire donc de la silice pure. Et en fait la surface de ta colonne est composé d'hydroxyle soit Si-OH qui a un pKa faible (aux alentours de 2 il me semble) donc si tu passes de l'eau dessus tous tes hydrxyles seront sous la formes Si-O- et donc ta colonne sera recouverte de charge -. Donc dans ce cas peut etre que l'ajout de NaCl c'est pour le role de contre ions pour stabiliser les charges - de la colonne.
    Tout travail merite salaire, j'attends toujours!

  8. #6
    Meningo

    Re : Chromatographie échangeuse d'ions

    Oui, j'avais compris.
    Mais ce qui me gêne c'est que , comme tu le signales, les colonnes sont souvent à base de silice. Or celles que j'utilise sont en fibre de verre ("glass fiber fleece") et dans mes souvenirs j'en avais jamais entendu parler pour l'échange d'ion.
    C'est pour ça que je doute sur l'échange d'ion...mais maintenant que j'ai mis le doigt sur le contre-ion...
    Bref, est-ce que les colonnes en fibre de verre sont bien des colonnes utilisées en échange d'ion ?

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  10. #7
    vitalogos

    Re : Chromatographie échangeuse d'ions

    bonjour à tous . je suis nouvelle dans ce forum
    voila je travaille sur la chromatographie échangeuse d'ions pour séparer et purifier les immunoglobulines type G.j'aimerai si possible que l'on me renseigne sur tout ce qui est en relqtion avec ça:
    je travaille avec du sephadex A-50
    au cours de mes études on a parlé d'activation des colonnes,je voudrais bien qu'on m'explique comment se fait l'activation et tout le principe
    merci de répondre et de m'éclairer sur ce points

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