choix colonne HPLC

[invite01f93b2c]

Bonjour a tous

En entretien on m'a demandé quelle colonne HPLC j'utiliserai pour analyser des polymeres, ou bien des proteines, ou des peptides ... en HPLC phase inverse.

pourriez vous m'eclairer sur ce sujet ???

Merci beaucoup !
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[invite01f93b2c]

personne pr me repondre ????

selon mes recherches...

peptides: plutot une C18
proteine: C4 ou C8
polymere: permeation de gel

quelqu'un peut il m'expliquer ???

[jgiovan]

Bonjour,

en phase inverse, pas question de faire de permeation de gel (également appellée GPC, ou exclusion stérique). Ce type de chromatographie n'est pas de la chromatographie d'affinité avec une phase stationnaire apolaire (inverse) mais sépare uniquement les composés en fonction de leur "taille".

Les peptides s'analysent bien en phase inverse avec une colonne de type C18 quand ils ne sont pas trop gros (quelques dizaines d'aminoacides). On les sépare en fonction de leur polarité/hydrophobicité ainsi qu'en fonction de leur charge (avec une phase mobile acide, les aminoacides basiques sont chargés positivement et réduisent le temps de rétention).

Les colonnes C4 ou C8 ont un pouvoir de rétention plus faible que les C18 et permettent d'analyser de gros peptides ou de petites protéines.

Au-dela de quelques milliers de Da, la chomatographie va montrer ses limites et l'électrophorèse ou l'exclusion stérique devront remplacer la phase inverse.

Pour ce qui est des polymères, tout dépend de leur nature et de leur masse moléculaire.
Pour des "petits" polymères issus de polycondensation, la phase inverse peut fonctionner (C4, C8 ou C18 selon le cas).

[invite01f93b2c]

Merci merci beaucoup !!!
C'est tres gentil d'avoir pris le temps de me repondre

[A voir en vidéo sur Futura]