bonjour,
je prépare un petit travail qui consiste a optimiser et a valider une methode de dosage par HPLC et mon objectif N°1 est d'augmenter l'efficacité de la colonne cad augmenter le nombre de plateaux theoriques N c'est un sujet qui s'eloigne un peu de ma specialité donc j'ai rencontré quelques petits soucis et voila mes questions :

-A l'origine ma phase mobile etait consituée de (tampon/ACN/MethOH) 70/10/20, et vu que mon produit à doser (fluconazole ) est polaire j'ai tenté alors de diminuer la polarité de ma phase mobile en changeant les proportions de cette derniere :1/ - (60/10/30) car le tampon est plus polaire mais je n 'ai eu aucun résultat ,je n 'ai pas compri pk ? est ce qu'en modifiant le nombre de moles de mon tampon j'ai touché a sa capacité ?
J'ai ensuite décidé de ne plus touché au tampon et de jouer entre le methanol et ACN :2/- (70/5/25) en considerant que le methanol est le moins polaire des 3, le nombre de plateaux a augmenté mais pas assez donc j'ai carrement enlevé l'ACN les résultats etaient satisfaisant mais est ce que l'ACN est indispensable lors du dosage d'un produit fini ?


-je veux egalement jouer sur le débit de la phase mobile qui est à 1ml/min ,je voudrais savoir est ce que l'equation de Van deemter s'applique telle quelle sur HPLC ?comment trouver le débit optimal pour une efficacité optimale?

merci d'avance