Optimiser la mesure d'une réaction

[invitef886667d]

Bonjour,

Je voudrais de votre aide, sil vous plait. Actuellement je travaille sur la mesure de l'activité estérase d'une enzyme utilisant p-nitrophényl acétate. Pour cela, je suis l'absorbance sur 24 heures. J'ai suivis un protocole pour la préparation de l'enzyme et du substrat qui ont déja été utilisés par d'autre personnes pour qui cela a fonctionné. Mais voila, lorsque je voulu reprendre les mêmes manipulations, j'ai l'absorbance qui dès le départ est très élevés. On m'a dis qu'il était conseillé d'optimiser mon protocole. Comment pourrais je le faire ?

Merci d'avance
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[invite21880cea]

Bonjour,

A tous les coups, ton détecteur est en train de saturer ; dans ce cas il faut diluer... As-tu fais une courbe étalon pour le paranitrophénol, avec la concentration max de p-nitrophenyl acetate égale à celle que tu as mise dans ton protocole ?

On est obligé de s'adapter à ce que peuvent voir les détecteurs. Sur ta courbe étalon, tu verras tout de suite si tu dois diluer ton échantillon avant analyse.

Sinon, ça peut aussi être une autre molécule qui fait parasite en absorbant en même temps que ton analyte. Dans ce cas fais un blanc avec juste le paranitrophénol puis avec ton milieu complet sans le p-nitrophényl acétate ni le paranitrophénol, mais avec l'enzyme... jusqu'à avoir trouvé le coupable !

Tiens nous au courant...

Cordialement,

Pok