Absorbance

[invite4ac61d3e]

Salut !
J'aimerais savoir pourquoi on doit utiliser une longueur d'onde située au voisinage de l'absorption maximale lors d'une mesure d'absorbance.
Merci d'avance de me répondre.
+
-----

[invitea26508d8]

Bah, réfléchis en terme de couleurs (longueur d'ondes différentes) Si tu passes une solution bleue et que tu lis l'absorbance à 700 nm qui correspond à la couleur rouge, il n'y aura aucune absorbance (ou du bruit de fond) Alors qu' aux alentours de 450nm tu auras une absorbance dans le bleu. Et c'est pour ca qu'on cherche le ou les lamda max. pour détecter de beaux pics et ainsi doser le produit en fonction de ca concentration.

[inviteec3fafed]

Pour être plus précis, plus ton absorbance est grande et plus ton protocole de mesure est sensible pour les raisons cités juste au dessus => plus ton seuil de détection, seuil de quantification sont faibles et meilleure est ta "résolution".

[invitea047670f]

bah plus vous considérez la valeur maximale de la longeur
plus vous éliminez ou vous déminuez l'erreur, c'est pour cette raison qu'on choisi la landa max.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite8633ed06]

Pour être plus précis, plus ton absorbance est grande et plus ton protocole de mesure est sensible pour les raisons cités juste au dessus => plus ton seuil de détection, seuil de quantification sont faibles et meilleure est ta "résolution".

En effet, si nous voulons mesurer l'absorbance d'une solution à plusieurs concentrations différentes pour pouvoir faire une courbe d'étalonnage, on cherchera avant tout à obtenir la meilleure précision possible.

Le but est de tracer une courbe d'étalonnage à l'aide d'une solution de différentes concentrations connues en mesurant ainsi leur absorbance. Une fois tracée, la courbe d'étalonnage te permettra de définir la concentration inconnue d'une même solution.
Et là, c'est toute une histoire de précision, que l'on retrouve dans la pente de la courbe d'étalonnage.

Si on se place à la longueur d'onde du maximum d'absorption, les mesures seront plus pertinentes dans le sens que les valeurs mesurées seront plus "espacées". La courbe d'étalonnage, généralement une droite, aura alors une pente plus importante.
Inversement, si l'on se situe à une longueur d'onde autre que celle du maximum d'absorption, les valeurs mesurées de l'absorbance pour chaque concentration seront moins "espacées". La courbe d'étalonnage a une pente plus "plateé. Il sera donc difficile de trouver à partir d'une valeur d'absorbance, une concentration précise.

En espérant avoir été clair...

[invite34305f8e]

Bonjour à tous,
Voilà j'ai eu un contrôle pratique en biochimie qui prposait de déterminer la concentrations de 2 solutions à partir d'une gamme étalon. Jusque là, tout va !!
Sauf que les absorbances de la gamme étalon atteignent 1 voire 2 en unités de DO et de ce fait la droite n'est plus droite du tout !!
Comment puis-je rectifier le tir sans pour autant diluer mes échantillons ?!
Merci d'avance !!