Impureté colonne C18 HPLC

[invite893d57c3]

Bonjour,

Voilà après une période d'arrêt de la pompe HPLC heureusement réamorcée après 8 jours , en passant des standards à 190 nm j'ai remarqué un pic réccurent de meme air exactement à chaque injection. Ce pic persiste avec injection d'eau ultra-pure et après plusieurs lavages de la colonne 40 min methanol 100% puis gradient methanol/eau 100, 50/50, 100 eau; 100% eau 2ml/min; gradient acetonitrile/eau. J'ai changé l'eau, le methanol et acetonitrile. d'après le temps de rétention et le spectre UV c'est un saccharide, probablement du saccharose, il ne change pas d'air après les lavages et son temps de rétention varie avec le changement de débit.
Ma question c'est est-ce possible que le saccharose se soit "lié" à la silice de la C18? si oui (ou non) que puis-je faire pour me débarasser de ce pic (je dose égament le saccharose et le pic est juste exactement au dessus!!!!!!

Merci
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[HarleyApril]

Bonjour

il est possible que l'impureté soit dans le système d'injection !
à laver également ...

cordialement

[invite893d57c3]

Merci pour ta réponse rapide
Je vais essayer immédiatement même si j'en doute un peu vu que le lavage automatique de la seringue se fait 5 fois entre chaque 2 injections...Mais j'espère que c'est ça j'en ai assez de voir ce pic fantôme qui m'a ruiné toutes mes analyses!!!!

[invite893d57c3]

ça marche pas même pic avec l'eau ultra pure même air et intensité même temps de rétention!!! il ne diminue pas d'un nano

[A voir en vidéo sur Futura]

[HarleyApril]

si tu as toujours le même temps de rétention, il se peut que ton impureté ne soit pas sur la colonne, mais dans ce que tu injectes :
injecteur
flacon
solvant de dilution

cordialement

[invite893d57c3]

Merci de tes réponses,
Étapes effectuées toujours pas de changment.
Ma question est est-ce possible que le sucre ou impureté en question peut "se lier" à la silice de la partie non greffée de la C18 ? si oui comment faire pour s'en débarrasser?

[moco]

Question un peu stupide. Pourquoi travailles-tu à 190 nm ? Il y a beaucoup de choses qui absorbent à 190 nm. Pourquoi ne travaillerais-tu pas à une longueur d'onde plus élevée ?

[invitea2dc9ca6]

il faut trouver les causes par elimination:
1-changer tout d'abort la colonne-voir resultats-
2-changer le solvant de preparation d'echantillion-voir resultats-
3-changer la seringue-voir resultats-
4-si pa de resultats positif votre cellule est contaminé

[invite893d57c3]

Question un peu stupide. Pourquoi travailles-tu à 190 nm ? Il y a beaucoup de choses qui absorbent à 190 nm. Pourquoi ne travaillerais-tu pas à une longueur d'onde plus élevée ?

Merci d'abord pour cette gentillesse "question stupide" ça se dit pas et si vous la trouvez stupide abstenez vous de répondre. Je me renseigne pour savoir si 100% du gel est greffée, et je ne vois pas en quoi c'est stupide.
En outre vous ne savez pas tout, dans mon échantillon je remplace le réfractomètre défectueux par l'UV à 190 pour détecter les sucres et ça marche car les composantes de ma matrices ne sont pas coélués avec les sucres en question et en plus je n'ai pas le choix. Alors arrêtez de répondre avec dédain. Montrez du respect ou évitez de répondre.

[invite893d57c3]

Merci de votre réponse

il faut trouver les causes par elimination:
1-changer tout d'abort la colonne-voir resultats-

Je n'ai pas d'autres colonnes

2-changer le solvant de preparation d'echantillion-voir resultats-
3-changer la seringue-voir resultats-

déjà changer l'éluant à plusieurs reprises
Pas de seringues de rechange (passeur automatique achat avec une seule seringue) et rinçées des dizaines de fois 5 entre chaque injection.

4-si pa de resultats positif votre cellule est contaminé

Si c'est le cas je dois démonter la cellule, je ne l'ai jamais fait, je vais voir le manuel pour voir cette possibilité, si c'est le cas je crois qu'il est cristallisé car j'ai lavés l'appareil pendant des heures à différents débits.

[invitea2dc9ca6]

oui je suit sur que votre colonne est contaminé .laver votre colonne avec de l'eau/ecétonitrile avec les proportions 10/90(%) a une temperature de 80°C à un debit de 1ml/min .si pas de resultat il faut changer la colonne

[invite5ccca8cf]

Merci d'abord pour cette gentillesse "question stupide" ça se dit pas et si vous la trouvez stupide abstenez vous de répondre. Je me renseigne pour savoir si 100% du gel est greffée, et je ne vois pas en quoi c'est stupide.

Sauf erreur de ma part je pense que moco parlait de sa propre question.

[sfnsfn2]

t'as pas pensé au méthanol, il absorbe à cette longueur d'onde !!!