Problème colonne HPLC C18
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Problème colonne HPLC C18



  1. #1
    invite9e613397

    Problème colonne HPLC C18


    ------

    Bonjour à tous,

    ça fait longtemps que je voulais m'inscrire sur ce forum et bien maintenant que je suis dans la m... ça a accéléré le processus!!

    Je fais l'analyse de certains composés organiques via une ACE C18 (de chez AIT) et avec gradient de phase : début 90% H2O acidifiée 0.8% acéto et 10% acéto puis vers la fin 70% acéto je crois et lavage 10min 100% acéto, le tout à 1ml/min.
    Mes étalons sont dans methanol.

    La colonne est neuve (l'ancienne a mouru) et là j'ai un gros souci de pression élevée que je n'arrive pas à résoudre. ça va jusqu'à 300 bars en fin de manip... normalement c'est 120.
    Pas de dépot dans mes bouteilles. je n'ai utilisé que des étalons pour le moment donc rien de dégueu et tt filtré sur 0.45µm.

    rien n'y fait, rinçage acéto, changement précolonne, rinçage à l'envers cette nuit... (on verra demain!)

    du coup je voulais savoir si qq aurait une idée pour m'aiguiller....
    (please!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! !!!)

    je pense sérieusement que ma colonne est bouchée mais bon pour une colonne neuve ça fait ch.....

    j'ai vu sur ce meme site que la précolonne pouvait se boucher aussi..???? et qu'il y avait un rinçage possible avec des solvants "dissolvants : methanol, acetonitril, isopropanol et variez leurs concentrations."
    comment faire concrètement? la précolonne se rince en la mettant directement dans ces solvants ou faut il mettre seulement la précolonne sur l'HPLC et runner qq heures...?

    de plus j'ai vu aussi qu'on pouvait faire un "backwash", c'est un run à l'envers simple? ou ya til moyen de rincer en faisant des va et vient dans la colonne sur une hplc??

    voilà!
    merci à ttes personnes qui peut m'aider!

    -----

  2. #2
    Taz64

    Re : Problème colonne HPLC C18

    Une première chose à faire si ça n'a pas été fait : démonte la colonne, vérifie les espèces de vis qui vont de la cannule à la colonne (j'ai oublié le terme technique de cette pièce...) et refait un test. Dèsfois ça suffit

    Sinon, tente de lancer un run sur une autre colonne quelconque qui traine par là, tu verras bien si le problème vient de ta colonne ou du système de filtration (ou autre...)

    Donne nous des news des résultats, on avisera

  3. #3
    invite9e613397

    Re : Problème colonne HPLC C18

    J'en ai changé un qui me semblait suspect. Pas de modif.
    J'ai changé ce matin le fritté de la vanne de purge. Toujours pression haute.

    J'avais déjà fait l'essai avec une autre colonne, ça marche très bien à mon grand désespoir!!!!!
    Merci Taz pour ton aide!

  4. #4
    invite9e613397

    Re : Problème colonne HPLC C18

    Je précise que la pression est non seulement haute mais qu'elle ne fait qu'augmenter en cours de run...
    (le mot que tu cherchais est "peek" je crois)

  5. A voir en vidéo sur Futura
  6. #5
    jgiovan

    Re : Problème colonne HPLC C18

    Bonjour,

    Ton exemple confirme tout le mal que je pense des colonnes ACE.
    Je fuis ces colonnes comme la peste car en plus d'être chères elles ont une durée de vie limitée. Je leur préfère en général les colonnes Zorbax de chez Agilent (chères également) ou Nucleodur de chez Macherey-Nagel.

    Une remarque cependant : tu filtres tes échantillons, c'est très bien, mais 0.45 um n'est pas toujours suffisant. Les colonnes modernes ont souvent des frittés de 0.2 um. Il vaut mieux filtrer à 0.2 um.

    En outre la plus grande source potentielle de contamination (algues ou micro-organismes) est la phase mobile. En principe tu peux limiter leur croissance en mettant quelques % de solvent organique (acetonitrile dans ton cas) dans la phase aqueuse mais ce n'est pas toujours suffisant. En fonction du type de plongeur que tu as dans tes réservoirs (crépine métallique ou filtres en verre) tu laisses passer des impuretés dans les lignes.

    Il faudrait que tu commences par purger ton système. Enlève la colonne et mets un by-pass à la place, puis purge les lignes avec un débit assez élevé (tu dois pouvoir aller jusqu'à 5 ou 10 ml/min). Le mieux serait de faire un purge au methanol pur en complément de l'eau et de l'acétonitrile, si ton système le permet.

    Une fois que tu as purgé le système sans colonne ni précolonne, tu peux monter la précolonne et répéter l'opération (à débit plus faible !). Puis tu termines avec le système complet, avec la colonne.


    Bon courage !

  7. #6
    Taz64

    Re : Problème colonne HPLC C18

    C'était bien peek, merci ^^

    Si les conseils de jgiovan ne permettent pas de récupérer ta colonne et si ta colonne est vraiment neuve, fais leur un mail qu'ils t'en envoient une autre...

    Bonne journée de bidouille...

  8. #7
    invite9e613397

    Re : Problème colonne HPLC C18

    ok je m'y met...
    mais je crois que je n'ai rien pour monter ma précolonne seule.... je vais voir ça...
    je vous tiens au courant!

  9. #8
    jgiovan

    Re : Problème colonne HPLC C18

    Salut,

    Fouille dans ton petit matériel. Au milieu des ferrules et des capillaires tu dois bien avoir de quoi faire un by-pass.

    En gros, il te faut deux connecteurs femelle-femelle que tu connectes aux deux extrémités d'un morceau de capillaire équippés de ferrules pour faire un by-pass.

    Sans ce genre d'accessoire ils est difficile de purger un système en l'absence de colonne. Cela dit, dans ton cas, ca doit boucher avant la colonne ou au niveau de la colonne, pas après.

    Tu peux aussi purger ton système en enlevant tous simplement la colonne et en mettant le capillaire dans une bouteille pour récupérer le solvant...

    Un dernier truc : est-ce que tu as démonté ta rhéodyne ?
    Il arrive que le disque en graphite, avec l'usure, fasse un peu de "limaille" qui termine dans les capillaires. Tu devrais vérifier la tête de ton disque et graphite et éventuellement le remplacer...

  10. #9
    invite9e613397

    Re : Problème colonne HPLC C18

    je confirme :

    j'ai de quoi faire un by-pass : la pression est correctement stable à 5ml/min. (139 bars)
    mais j'ai tout farfouillé et je n'ai pas de moyen de rincer ma précolonne seule.
    elle est de ce type :
    http://www.ace-hplc.com/assets/downl...ue_2009-10.pdf
    page 35

    je vais rincer tt ça ensemble comme dis précédement.
    50 meoh, 30 acto et 20 h2o à 0.2mL/min.

    oui j'ai démonté ma rhéodine. tout est ok.

  11. #10
    jgiovan

    Re : Problème colonne HPLC C18

    Super : zero dead volume, maxi-problèmes !
    Tu es bon pour changer la cartouche ou l'enlever...

    Franchement, je n'ai jamais été un grand fan des précolonnes.
    Si elle remplit son office elle colmate en premier et fusille tes analyses...

    Vu ce que tu expliques, le plus probable est que la précolonne soit bouchée. A ta place je ne m'embêterais pas trop à essayer de la nettoyer, je la changerais ou je l'enlèverais carrément...

  12. #11
    invite9e613397

    Re : Problème colonne HPLC C18

    Eh oui mais le "problème", c'est que je l'ai changée : la précolonne aussi est neuve.
    Et montée seule, la colonne connait le mm problème... on dirait vraiment qu'elle est bouchée mais avec quoi...???? j'ai du mal à comprendre...
    c'est notre deuxième colonne ACE, la première avait fait son temps avec pas mal d'analyse au compteur....

  13. #12
    jgiovan

    Re : Problème colonne HPLC C18

    Re,

    Dans ce cas, effectivement, il ne reste plus qu'à incriminer la colonne (cf. mon 1er post dans ce file). Contacte le SAV et essaie de faire remplacer ta colonne...

  14. #13
    invite9e613397

    Re : Problème colonne HPLC C18

    Ok merci beaucoup pour votre aide... j'attends mon chef mardi et je vous tiens au courant de la suite!

  15. #14
    invite9e613397

    Re : Problème colonne HPLC C18

    Salut à tous,
    On a p avoir une nouvelle colonne de chez notre fournisseur. Sans problème en plus!
    La nouvelle fonctionne a merveille.

    Comme quoi, ça peut venir du conditionnement du départ.

  16. #15
    jgiovan

    Re : Problème colonne HPLC C18

    Salut,

    Content pour toi !

    J'espère que vous avez obtenu une ristourne du fournisseur ou du fabricant !

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