Dilutions

[ma-math]

Bonjour,

Je dois effectuer un dénombrement et densité optique de suspension bactérienne.
J'ai un milieu de 10mL contenant des bactéries.

Pour la densité optique, je prendre 1mL de suspension de que passe au spectro.
Pour le dénombrement, je dois effectuer une dilution afin de pouvoir compter celle-ci.
Comment puis-je procédé à ma dilution. (En sachant que je dois le faire tout les 2 jours et que je n'ai que 10mL). Si je prend 100µL de suspension, dans combien de mL dois-je le mettre et ensuite placer 100µL sur ma gélose.

J'espère que j'ai bien su m'exprimer.
Merci d'avance!
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[Kemiste]

Bonjour,

Il manque des infos. Tu parles de dilution mais tu ne dis ni à combien doit être diluée la solution ni à quelle concentration est ta solution initiale de 10 mL. Tu dis que tu dois répéter ta mesure tous les 2 jours mais tu ne dis pas pendant combien de temps. On ne peut donc pas savoir quoi faire. Et je ne sais pas si la question concerne vraiment la chimie.

[Cliolamuse]

Bonjour Ma-math,

j'ai deux questions avant de t'aider, si tu veux bien:
1) pour toi, à quoi sert la DO (densité optique): quel est l'intérêt de passer la suspension au spectro?
2) pendant combien de jours dois-tu "suivre" cette solution? tu fais un abaque avec des points tous les 2 jours? peux-tu s'il te plaît préciser le contexte (TP? cours? stage? objectifs?)?

Clio

[Cliolamuse]

+ 1 avec Kemiste: c'est une question de microbiologie (bien que pour la résoudre en partie, on utilisera une formule... chimique!)

[A voir en vidéo sur Futura]

[ma-math]

Justement, je ne sais pas la concentration, ca me servira pour connaitre la concentration bactérienne de ma solution initiale. Je dois la mesurer 4-5 fois si possible.
Et c'est pour un stage

[Kemiste]

Là je ne vois pas trop quoi faire... Comme je le pensais et comme l'a dit Cliolamuse c'est plus un problème de bio. Comme tu es en stage, tu pourrais peut être en parler avec ton maître de stage qui pourra, je le pense et je l’espère car c'est aussi son rôle, t'aiguiller. Sinon tu pourrais te renseigner dans la partie bio du forum (ou demander à déplacer cette conversation si tu comptes poser la même question pour éviter un doublon).

[Cliolamuse]

Bon, voici ce que j'en dis en tant que microbiologiste junior:

La DO te permet de déterminer la concentration de ta solution bactérienne si tu as l'abaque (= courbe de croissance en fonction de la DO) de ta bactérie.

Donc, si tu n'as pas cet abaque, tu DOIS le déterminer avec un MAXIMUM de points. Par ex. pour une souche d'E.coli, tu fais un point à T=0, puis des points T=30 min (phase de latence plus ou moins longue selon les bactéries) jusqu'à ce que la phase exponentielle démarre (DO qui augmente) : là, il faut faire des points toutes les 15 min pour avoir une belle courbe et enfin ta solution va atteindre la phase stationnaire (DO qui stagne). En général, l'abaque se fait sur 24-48h (selon les bactéries) avec une répétition au moins + des prises de points supplémentaires si tu rates la courbe --> je ne comprends donc pas pourquoi tu dois juste faire 4-5 points sur 2 jours...

A chaque point: tu dois prendre la DO + faire un dénombrement (après dilution pour pouvoir lire le dénombrement sur boîtes) --> tu reportes les points sur un axe DO/nombre d'UFC/mL = ton abaque de la bactérie étudiée.
Les dilutions se font d'abord à tâtons: par ex.: j'estime qu'il y a 10^9 UFC/mL dans ma solution d'E.coli au bout de 24h/37°C: je fais donc des boîtes de dilutions 10^-6, 10^-7, 10^-8, 10^-9 pour être sûre d' avoir un nombre de colonies dénombrable (~15-300 colonies). --> est-ce que tu comprends la démarche?

Une fois que tu as ton abaque, tu peux utiliser la DO pour déterminer la concentration d'une solution de ta bactérie et donc faire un simple: ci*Vi= cf*Vf --> Vi (volume à prélever dans ta solution bactérienne)= cf (concentration souhaitée de ta dilution)*Vf (volume souhaité de solution diluée, engénéral 10mL)/ci (concentration de ta solution bactérienne donnée par l'abaque). --> est-ce que çà répond à une partie de ta question?

[ma-math]

Oui merci j'ai plus ou moins saisi, je demanderais plus en détails lors de mon stage

[Cliolamuse]

Ok!

N'hésites pas à nous dire ce qu'il en est.

[Kemiste]

La réponse est donc plus bio que chimie