Séparation alanine glycine

[invitebfef4c62]

Bonjour

Je suis en maths spé PC et dans la cadre de mon TIPE je souhaiterai séparer et connaitre les proportions d'alanine et de glycine d'une solution. L'alanine et la glycine que je veux étudier proviennent du fil d'araignées, ne disposant pas de beaucoup de fil les acides aminés seront en faibles quantités. De plus les deux molécules sont très similaires (elles ne se différencient que par un méthyle pour l'alanine) donc leur propriétés sont très proches (pKa, pHi...).
Après de nombreuses recherches internet il semblerait qu'il soit possible de séparer les deux acides aminés par chromatographie échangeuse d'ions. Cependant je ne trouve aucun détails sur cette technique que je ne connais pas vraiment. Quelqu'un peut il m'expliquer comment la chromatographie échangeuse d'ions pourrait ma permettre de séparer l'alanine de la glycine ? Et si quelqu'un connait une autre méthode pour séparer ces deux acides aminés je suis intéressée !

Merci d'avance
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[invite54bae266]

Je pense que pour utiliser la chromatographie echangeuse d'ions dans ton cas il faut qu'une seule des 2 molecules soit chargee. La molecule chargee sera alors plus retenue par la resine echangeuse et la molecule neutre sera eluee plus rapidement et sortira de la colonne en premier.

Il suffit de choisir la colonne adaptee a la forme ionique en solution. Tout dependra donc du pH de la solution des acides amines.

As-tu une idee de comment t'y prendre ?

[invite54bae266]

J'ai oublie le principe : une resine echangeuse d'ion echange un cation par un cation bien precis (selon la resine) si elle est dite "cationique" ou alors un anion par un anion si elle est dite "anionique". La resine est un polymere insoluble qui comporte souvent des fonctions SO3- pour les resines cationiques et NH4+ pour les resines anioniques. Quand une solution de KCl passe a travers la resine, disons une cationique Na+, le produit qui en resort est NaCl. Pour la chromatographie, c'est comme pour la chromatographie sur silice ou alumine sauf que les molecules chargees remplacent les ions de la resine. Plus un ion est charge, plus il sera donc retenu car lie avec plusieurs sites de la resine. Si tu veux ensuite eluer ces molecules, il faudra utiliser une solution concentrer en sel, l'eau n'etant pas chargee, elle ne delogera pas ton produit. Comme tes produits sont de petits acides amines faiblement charges, un solution faiblement concentree en sel suffira a les separer. Au contraire, une solution concentree eluera les 2 produits a la fois probablement.

J'espere aue cela t'aidera.

PS : desole pour le double-post.

[invitebfef4c62]

Merci pour ta réponse

Ton explication est très claire.

En revanche pour la mise en place expérimentale j'ai un peu plus de mal à me la figurer.
Le fil d'araignée ne peut être dissous que dans de la base. Donc si je le dissous dans une solution de soude diluée les deux acides aminés seront sous forme ionique et donc chargés, non ? Je ne vois pas comment obtenir une molécule chargée et une neutre...

[A voir en vidéo sur Futura]

[vpharmaco]

Si tu souhaites déterminer la composition en acides aminés d'une protéine, il ne faut pas la "dissoudre", mais "l'hydrolyser", c'est à dire couper la chaine peptidique en acides aminés. Cela peut se faire par hydrolyse acide ou basique (meme si on le fait habituellement en milieu acide) et demande des conditions vigoureuses. Typiquement, on utilise HCl 6mol.L^-1, à reflux (110°C) pendant 20-24h (à peu de choses près, c'est les mêmes conditions en milieu basique).

Pour séparer les aa, plusieurs techniques sont possibles (chromatographie liquide, gazeuse, etc), mais cela suppose d'avoir accès à l'équipement et aux colonnes nécessaires. As tu accès à des GC(MS) ou des systèmes HPLC ?

[invitebfef4c62]

En effet l'hydrolyse parait beaucoup plus adaptée.
Je suis justement en train d'essayer d'établir un contact avec un laboratoire pour avoir accès au système HPLC, cependant mon contact n'est pas très réactif à ma demande et peu optimiste quant au résultat que nous pourrions obtenir.

[invite54bae266]

Au-dela du fait que les resultats puissent etre moyens, c'est ton budget qui va surement prendre cher ! C'est pas gratuit la biochimie ... Contacte plutot une universite ou un labo de recherche.