Demande protocole pour déboucher colonne HPLC

[invite01ea8c3e]

Bonjour,

J'ai un problème concernant ma colonne HPLC qui est en train de se boucher. J'ai une pression de 240 bar alors qu'il y a quelques mois elle était de 190 bar sachant que la pression max de la colonne est de 250 bar!

J'utilise une précolonne dont le filtre est changé régulièrement et la chaine HPLC a été lavé sans colonne il y a 2 mois. Sans colonne j'ai une pression d'environ 10 bar, donc je pense que le problème vient vraiment de la colonne qui se bouche de plus en plus au fur et à mesure des injections.

Avez-vous un protocole pour déboucher la colonne? Actuellement je rince avec de l'eau et de l'acétonitrile en faisant des gradients et des plateaux isocratiques avec ces 2 solvants. J'ai essayé aussi avec du méthanol sans trop de succès.

Est qu'en utilisant 2 solvants de polarité très différente j'arriverais à mieux déboucher et plus vite (par exemple acétonitrile et di ethyl ether qui sont miscibles)?

Voici les conditions opératoires lors des injections :
A : eau MilliQ/acide acétique (100V/0,1V)
B : acétonitrile
Colonne : Phenomenex Luna C18 (15cm 4,6mm 3µm)
Echantillon : extrait de poire filtré sur PTFE 0.45µm



Merci beaucoup pour votre aide

Alexandre
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[invite23092bcd]

Salut,

as-tu des frittés en tête et en fin de colonne ? Si oui ce sont peut être ces derniers qui sont bouchés, peut être qu'ils n'ont pas supporté un solvant ? Utilises tu toujours uniquement l'eau et l'acétonitrile comme solvants ?

Si le problème vient effectivement de la colonne je pense que la meilleure solution est effectivement d'utiliser du méthanol ou de l'isopropanol. Eventuellement un petit passage dans un bain à ultra-sons ?
(C'est la méthode que j'utilise quand mes colonnes de chimie en flux bouchent)

Kirtyes

[invite01ea8c3e]

Salut Kirtyes,

Non je n'ai pas de frittés en tête et fin de colonne. Juste un filtre dans la précolonne qui a été changé dernièrement (je vais quand même en mettre un neuf après le lavage de la colonne histoire que tout soit nickel!). Oui juste de l'eau acidifié à 0.1% et de l'acétonitrile.

Je vais donc essayer l'isopropanol. Le bain à ultrasons risque de briser la silice à l'intérieur de ma colonne non?

Merci de tes conseils,

Alexandre

[inviteac45697a]

Est-ce que tu as une idée avec quoi ta colonne se bouche?
Si c'est plutôt des particules, ou quelque chose de très hydrophobe qui reste dans la colonne? ou des sels qui précipitent?

tu pourrais essayer de nettoyer la colonne en la mettant dans le mauvais sens.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite01ea8c3e]

Bonjour Gramon,

Je pense que ce sont les sucres de la poire qui bouchent la colonne. Oui peut être des composés hydrophobes (apparemment il faut utiliser l'isopropanol pour les éliminer) par contre pas de sel, je n'ai jamais utilisé de tampon, juste acétonitrile et eau acidifiée avec de l'acide acétique à 0.1% pour mes phases mobiles.

C'est donc ce que je vais faire, la laver en sens inverse. Pour l'instant je lave l'HPLC car finalement elle a encore été contaminé, sans doute par des sucres alors qu'elle avait été nettoyé il y a moins de 2 mois ...

Merci

[inviteac45697a]

si ce sont des sucres, il vaudrait mieux laver la colonne à l'eau ou dans un solvant ou les sucres sont solubles. Peut-être que tu peux aussi augmenter un peu la température de la colonne pour faciliter la dissolution

[invite01ea8c3e]

J'ai enfin réussi à déboucher ma colonne (il y avait plein de particules dans mon bidon de déchet!!), merci à tous pour vos conseils.

Voici le protocole qui pourra servir à d'autres que j'ai eu par Phenomenex et qui rejoint ce que vous m'avez conseillé :

- Déconnecter la colonne du détecteur
- Enlever la précolonne
- Monter la colonne à l'envers
- Rincer avec 10 volumes de colonne d'un mélange 95%eau/5%acétonitrile
- Rincer avec 10 volumes de colonne d'isopropanol
- Rincer avec 10 volumes de colonne d'un mélange 5%eau/95%acétonitrile
- Remettre la colonne dans le bon sens
- Rincer avec 10 volumes de colonne de votre phase mobile

Attention : Mettre un débit entre 1/5 et 1/2 du débit utilisé dans votre méthode d'analyse.