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Exercice sur dosage HPLC par étalon interne



  1. #1
    nlbmoi

    Exercice sur dosage HPLC par étalon interne

    Bonjour

    Dans un exercice sur le dosage par étalon interne (cf pièce jointe), je suis un peu perdu : je n'arrive pas à trouver comment la quantité de CAP dans l'échantillon.
    Pourriez-vous m'aider ?

    Merci d''avance
    hplc.png

    -----


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  3. #2
    moco

    Re : Exercice sur dosage HPLC par étalon interne

    J'espère que tu vois que,
    1) la surface du pic CAP est "presque" proportionnelle à la quantité injectée.
    2) la quantité injectée dans tes premières mesures est de 0.01 microgramme, puis 0.02, puis 0.03, puis 0.04 microgramme,
    3) ton échantillon a une teneur en CAP comprise entre 0.02 et 0.03 microgramme, mais plus près de 0.02 microgramme.

    Pour trouver la valeur exacte, il faut faire une interpolation linéaire entre 0.02 et 0.03 microgramme, intervalle dans lequel la surface du pic augmente de 1840 - 1268 = 572.
    Toi, ton analyse te donne une surface de 1375, qui se trouve donc à 1375 - 1268 = 107 unités de surface supérieur au repère de 0.02 microgramme.
    La teneur en CAP est donc supérieure à 0.02 d'une quantité égale à 107/572 de 0.01 microgramme. Fais le calcul. Tu vas trouver une teneur de environ 0.022 microgramme

  4. #3
    Kemiste

    Re : Exercice sur dosage HPLC par étalon interne

    Bonjour.

    Ici il s'agit d'un étalonnage interne. Comme tu peux le voir, pour une quantité donnée de caféine l'air du pic n'est pas exactement la même. Pour prendre en compte cette variation, pour chaque injection, on injecte, en plus du produit à analyser, toujours la même quantité d'un autre composé = l'étalon interne.

    Pour chaque injection il faut donc tenir compte de l'air du pic de CAP et de l'air du pic de la caféine. Pour une quantité donnée de CAP il faut faire le rapport entre l'air de l'échantillon et l'air de l'étalon interne (S1/S2) et tracer le graphe quantité de CAP en fonction de S1/S2. Tu détermines alors la droite de l'équation. Pour ton échantillon inconnu tu calcules S1/S2 et avec l'équation tu retrouves la valeur de la quantité de CAP.

  5. #4
    nlbmoi

    Re : Exercice sur dosage HPLC par étalon interne

    Le fait que ce ne soit pas exactement proportionnel c'est lié à la technique (volume d'injection notamment) ? C'est pour cette raison qu'on ajoute un étalon pour moduler sur chaque mesure les imprécisions sur le dispositif expérimental ?
    Avec la méthode proposée, j'arrive à une concentration de 22.45 µg/L

    Merci

  6. #5
    Kemiste

    Re : Exercice sur dosage HPLC par étalon interne

    C'est bien ça. Il peut y avoir des erreurs si le volume injecté n'est pas rigoureusement identique à chaque injection. L'étalon interne permet de "corriger" cette variation.

    Je n'ai pas vérifié les calculs mais la valeur trouvée est concordante avec les valeurs données (aire proche de l'échantillon à 20 µg/mL).

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    nlbmoi

    Re : Exercice sur dosage HPLC par étalon interne

    Bonjour

    Une dernière question : ici, on trace S(ech)/S(etalon) en fonction de C(ech).
    Par contre, si la quantité d'étalon était différente pour chaque mesure, il faudrait dans ce cas là tracer C(etalon)*S(ech)/S(etalon) ?

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  10. #7
    Kemiste

    Re : Exercice sur dosage HPLC par étalon interne

    Dans le cas d'un étalonnage interne la quantité d'étalon doit être rigoureusement identique dans chaque solution que tu analyses. Comme tu "corriges" l'aire du pic de ton échantillon à analyser grâce à cet étalon, changer sa quantité d'une solution à l'autre n'aurait pas de sens.

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