Réaction enzymatique ONPG + E -> ONP

[invitebf8f4fd2]

Bonjour,

Je suis entrain de travailler sur un TP similaire à celui ci en lien : http://www.perrin33.com/polys/protei...-michaelis.pdf

J'ai cependant 2 questions et j'aimerai savoir si j'ai bien compris

Tout d'abord petite précision la pratique est la meme. On fait reagir un (ONPG) orthonitrophényl-beta-D-galactoside avec de la beta-galactosidase pour obtenir du (ONP) orthonitrophénol et du galactose

Pourquoi etudier l'absorbance à 420 nm ?
On etudie l'absorbance à 420 nm car on etudie la formation du produit ONP à partir de la reaction enzymatique de ONPG. De plus un produit de couleur jaune, absorbe au maximum de 420 nm

Pourquoi ONP absorbe dans le visible à la difference de ONPG qui n'absorbe pas dans le visible ?
Le produit ONP est de couleur jaune alors que le substrat ONPG est incolore. Ce qui veut dire que ONP absorbe dans le visible la couleur bleue à la difference de ONPG qui est incolore. Il a donc une absorbance qui est nulle.


Note supplementaire http://stl.bgb.liberte.free.fr/micro...ches/onpg1.pdf

Etes vous d'accord avec moi pour ces deux questions ?


Merci pour votre aide, je remercie encore une fois cette super communauté !
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[HarleyApril]

Bonsoir

Oui, tu as bien compris le principe.

Bonne continuation

[invitebf8f4fd2]

Bonsoir

Oui, tu as bien compris le principe.

Bonne continuation

Merci pour ta réponse j'ai cependant une dernière question.
Je ne comprend pas le rôle du Na2Co3.
J'ai tourné le truc dans tout les sens.
Je dois trouver 2 intérêts mais j'ai aucune idée.
Na2Co3 joue le rôle de catalyse ?

[invitebf8f4fd2]

Mais non pas du tout. Le Na2Co3 permet de stopper la réaction mais je ne trouve pas les deux rôles.
Je ne vois pas.

[A voir en vidéo sur Futura]

[HarleyApril]

Bonsoir

L'enzyme ne fonctionne que dans une certaine gamme de pH.
L'ortho-nitrophénol n'est pas très soluble dans l'eau, sauf à pH basique.

Bonne continuation