Dosage de DMDM Hydantoine par HPLC

[invitef516b9a5]

Bonjour,
Je suis en BTS BIO-AC et je suis actuellement ne stage dans un laboratoire de cosmétique au poste d'HPLC.
Mon projet et de doser le DMDM Hydantoine présentent dans certains gel douches / creme lavante.
Nous avons une méthode que j'ai suivi, mais il s'avère que la séparation n'est pas optimal. J'ai obtenu un seul pic
bien beau et net, mais aprés, un autre pic vient se meler a celui de l'hydantoine et fausse tout les résultats

La méthode consistait a dilué notre échantillon dans de l'eau HPLC (Surement pour libéré le formol de l'hydantoine)
et de réaliser une réaction d'hydrolyse avec un réactif (7.5g d'acetate d'ammonium + 150µL acide acétique + 100µL acetyl acétone dans 50 mL Eau HPLC)
Cette échantillon étant ensuite passer sur hplc avec Eau (50%) et Acétonitrile (50%) au debit de 1.5mL/min

Les résultats n'étant pas concluant du tout. J'ai éfféctuédes recherches et j'ai trouvé une autre méthode.
La solubilisation de l'echantillon était réalisé dans du THF a 90%
Avec Eau (55%) et Acétonitrile (45%) avec un débit de 2mL/min

Je suis un peu perdu a vrai dire et j'aurais besoin d'aide. Merci beaucoup
-----

[Kemiste]

Bonsoir.

Il faudrait connaitre les caractéristiques de la colonne que tu utilises pour donner plus de précisions. As-tu essayé de faire un gradient ? As-tu essayé d'autre proportions eau/ACN ? As-tu essayé de tamponner ton éluant HPLC ? Quels volumes injectes-tu ?

Petite précision, vu que tu es en stage, es-tu autorisé à donner des détails sur un forum ?

[invitef516b9a5]

Bonjour
Il y a certaines choses que je ne peux pas révéler mais rien de tout ce que tu me demande.
En effet hier j'ai lu que la molécule a doser était hydrophobe, j'ai donc augmenter grandement la concentration en eau (80 pour 20% ACN), et ce matin, la séparation était correcte mais pas encore réellement exploitable, je viens de relancer en augmentant encore le % eau.

J'utilise une colonne c18 de 250*4.6 mm. Quand au volume, j'ai deux méthodes qui se contredisent, c'est assez embêtant. J'injecte donc 20µL de notre calibration.

[GrimpPhyto]

Salut,

Tu peux en effet commencer à 98%H2O, et faire un gradient, peut être avec un plateau isocratique pour bien séparer. Tu utilises quelles type d'HPLC? Thermo? Waters? Agilent? Le volume d'injection ne joue pas énormément sur la séparation.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitef516b9a5]

C'est une Agilent.
La séparation est bien a 85% d'H20.
Je me suis donc occupé de faire la calibration et de passer nos dosages. Cela semble assez correct dans l'ensemble, mais nous avons quand même pris soin d'extériorisé l'analyse afin de voir si les résultats avec un autre labo son proche.
J'ai pensé a faire un gradient en effet oui, mais apparemment, selon ma mitre de stage cela serait trop "complexe".

Le gradient pourrait-il me faire avoir mon pic d’intérêt plus net/joli ? Car actuellement il est un peu étalé (je pensais au départ que c’était du a la colonne).
Si le gradient permet cela, j'augmenterais donc le % ACN après le passage du premier pic

[Kemiste]

Tu pourrais en effet avoir des pics plus fins avec un gradient. S'ils trainent en isocratique, le fait d'augmenter le pourcentage d'ACN au cours du temps les fera sortir plus vite, donc plus fins. Il n'est pas nécessaire d'attendre que le premier pic sorte pour commencer son gradient. Tu peux faire ton gradient dès le début. Tu pourrais ainsi également diminuer ton temps d'analyse.

En pratique, il n'y a rien de complexe à faire un gradient. Comme pour l'isocratique, il faut essayer plusieurs proportions et voir ce que ça donne.

[invitef516b9a5]

Mon temps d'analyse est déjà bien court , je vais essayer cela alors

[GrimpPhyto]

Quelle est la taille de particules de ta colonne? J'imagine 3 ou 5um, si c'est la cas, le gradient ne va pas beaucoup jouer sur le pic!

[Kemiste]

Je ne serai pas aussi catégorique. Tout dépend des temps de rétention et de la largeur des pics. J'ai déjà eu de nettes améliorations avec des pics qui sortaient "tard" et très étalés quand je suis passé à un gradient.