Chromatographie

[invite1027b10f]

Bonjour à tous,
j'ai des questions concernant la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem :
1/ l’intérêt et l'indispensabilité de l'ajoute d'un étalon interne, et lorsqu'un étalon interne marqué par un isotope stable est utilisé combien de positions doivent être marquées.
2/ le but d'ajouter un échantillon blanc et un échantillon supplémenté dans la série à contrôle, l'injection d'un solvant (h2o) et aussi l’intérêt de l'injection d'un standard au début et à la fin de la série.
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[HarleyApril]

Bonjour
Un étalon interne subira les mêmes pertes que la molécule à doser, même s'il y a des variations de rendement lors des extractions ou de la chromatographie. Ceci permet donc de diminuer la variabilité.
Lorsqu'on marque par un isotope stable, on en met autant qu'on veut. Le point à prendre en compte est de bien différencier le produit marqué du produit parent. Par exemple, si ta molécule a un chlore, ce serait dommage de faire une molécule marquée avec deux deutériums car son pic correspondant au 35Cl sortirait en même temps que le produit parent avec 37Cl.
Un standard en début et fin de série permet de vérifier qu'il n'y a pas de dérive au cours de l'analyse.
Un échantillon supplémenté permet de vérifier que c'est bien le produit qu'on quantifie (par exemple, il pourrait y avoir un temps de rétention légèrement différent du fait des autres composants)
Le blanc permet de déterminer quels sont les pics qui ne font pas partie de l'échantillon, ce sont des artefacts, on ne les intègrera pas.


Cordialement