Comment éliminer le lactate des vins pour faire un dosage enzymatique de l'alcool?

[inviteb061eab7]

Bonjour ,
Je voudrais doser l'ethanol dans les vins avec une solution enzymatique ( alcool dehydrogenase ADH ) mais je me heurte à l'interference de l'acide lactique qui reagit aussi avec la NAD ( et donne de la NADH qui absorbe vers 340 nm ) et augmente l'absorbance, faussant ainsi les resultats .
Y a t il une astuce pour eliminer facilement l'acide lactique ( ou sous forme de lactate ?) , avec une sauce chimique sympatique qui complexerait et precipiterait avec les lactates
grand merci pour vos idées
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[Flyingbike]

l'acide lactique ne permet pas la réduction du NAD en NADH en absence de lactate deshydrogénase. Etes vous sur que l'acide lactique contribue au signal observé ? Si vous mettez du NAD et du lactate dans votre solution, vous avez production de NADH ?

Quel est votre protocole ?

Je vois deux solutions :
Faire agir de la LDH avant le dosage à l'ADH pour dépléter en lactate
Saturer en pyruvate pour éviter la formation de NADH via réaction du lactate

Ce genre de biochimie n'est pas spécialement complexe mais il faut avoir les bons contrôles pour pouvoir trancher.

[inviteb061eab7]

l'acide lactique ne permet pas la réduction du NAD en NADH en absence de lactate deshydrogénase. Etes vous sur que l'acide lactique contribue au signal observé ? Si vous mettez du NAD et du lactate dans votre solution, vous avez production de NADH ?

Quel est votre protocole ?

Je vois deux solutions :
Faire agir de la LDH avant le dosage à l'ADH pour dépléter en lactate
Saturer en pyruvate pour éviter la formation de NADH via réaction du lactate

Ce genre de biochimie n'est pas spécialement complexe mais il faut avoir les bons contrôles pour pouvoir trancher.

Merci pour ces explications
Je viens de me rendre compte que j'ai fait une erreur dans le commentaire : l'absorbance n'augmente pas mais diminue puisque le taux d'alcool est minimisé .
je viens de mettre de l'acide lactique ( teneur de 5g/l) dans le reactif enzymatique ( NAD 50mg/l + ADH à pH 9) et j'observe une baisse quasi immediate d'absorbance ( tension eau 1000 tension reactif 660 tension avec ajout acide lactique 900)
ce qui voudrait dire que la NAD se transforme et diminue en quantité ?
solution : mesurer l'absorbance avant ajout de la ADH pour tenir compte de l'influence de l'acide lactique puis ajout de ADH et remesure de l'absorbance , en esperant qu'il reste suffisament de NAD pour reagir ( eventuellement en rajouter ?) ?