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Substitut à l’imidazole dans les élution Ni-NTA



  1. #1
    PCDNA

    Substitut à l’imidazole dans les élution Ni-NTA


    ------

    Bonjour,

    Comme beaucoup doivent le savoir, la règlementation demande de virer tous les produits CMR de nos manip.

    Je travail en biotechnologie et je suis amené à faire beaucoup de purification de protéine.
    Le grand classique c’est un His-tag sur la protéine (6 histamine en début ou fin de protéine).
    Cela permet des les purifier très facilement en utilisant le système Ni-NTA (ion Ni2+ chélaté sur une résine NTA).

    En gros : c’est un échange d’ion. Le Ni et chargé+ et les histidine - (en pH neutre ou basique)….
    L’élution se fait par compétition en ajoutant sur solution d’imidazole qui en gros vient prendre la place du tag poly-histidine.

    Le problème c’est que l’on n’a plus le droit d’utiliser l’imidazole et on le remplace actuellement par une solution d’histidine ou d’arginine mais c’est très très loin de faire l’affaire (rendement, sélectivité temps de manip…).

    Aussi, je cherche « un truc » avec les mêmes caractéristique de charge et de polarité que l’imidazole mais qui n’est pas CMR et soluble dans l’eau jusqu’à 300 ou 400 mM et qui ne coût pas non plus un bras.
    Dans un premier temps ; j’avais pensé au Pyrazole et d’autres du même style mais comme tout ce qui « semble être efficace » : c’est CMR.

    Avez-vous une idée?

    Merci d’avance

    -----

  2. #2
    ecolami

    Re : Substitut à l’imidazole dans les élution Ni-NTA

    Bonjour,
    Une suggestion chercher des derives substitués
    ?
    Je dis ça parce pour les aromatiques le Benzène est trés toxique et le toluene ou les xylènes le sont moins.

  3. #3
    PCDNA

    Re : Substitut à l’imidazole dans les élution Ni-NTA

    Merci ecolami.
    Mais mes manip sont en phase aqueuse donc le toluène ou les xylème ne fonctionneront pas a moins qu'il existe des hétérocycle azoté du toluène ou du xylène.

    Dans l'élution des protéines dans le système: protéine tagué à l'histidine / Ni-NTA, c'est l'imidazole "qui prend la place " des histidine car il est plus chargé.
    Dans l'imidazole le N en position 1 est très chargé électroniquement...

    Il faudrait que je trouve un hétérocycle de toluène assez soluble dans l'eau.
    Ou une molécule très chargé négativement en pH 7 ou légèrement basique...

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