Probelme HPLC transfert de methode

[hakkai]

Bonjour,

Je viens sollicité votre aide suite a un probleme de transfert de methode sur une chaine HPLC 1260 infinity 1.
L'idée est de transferer une methode sur une autre chaine HPLC (mm modele, mm colonne, mm detecteur, mm methode)

Le probleme c'est que lors du 1er run, la chromato nous delivre bien le profil chromato attendu. Cependant lors du second run (mm methode, mm vial, mm sequence, rien n'a changé!) la profil chromato n'a rien a voir.

Voici les captures des 2 chromatogrammes
Capture 1 ok.PNG
Capture 2 non ok.PNG


Nous avons pensé a une defaillance de la vanne quaternaire qui ne delivrerai pas le bon gradient, nous l'avons changé mais rien n'y fait!
Nous avons pensé a la vanne 6 voie sur le compartiment colonne qui ne switcherai pas bien entre la position 1 et 2 ... Mais ce n'est pas ca,
Nous avons pensé a la pompe qui pomperai en mm temps les voies C et D mais c'est pas ca...
Nous avons carrement changé le module de pompe, et rien n'y fait.

Le 1er run est ok et le second (et les suivants) dans la mm sequence d'analyse .

Si vous avez des idées, je suis preneur.

Merci pour votre aide.
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[Baal149]

Bonjour,

C'est sans doute évident mais avez vous pensez à vérifier les solvants d'élution. Une inversion lors d'une recharge par exemple, un solvant ayant été contaminé ou encore un problème de tampon (si utilisé) sont possibles (le problème ayant été introduit entre le 1er et le 2e run).

La méthode est elle actuellement testée sur un produit éprouvé, ou est elle testé sur un milieu brut ?
Testé un ou des produits purs de références permettrait de s'assurer que le problème vient bien de la chaine HPLC et non du milieu.

Possible dégradation de la colonne ? Mais si vous utilisez cette méthode avec la même colonne, depuis longtemps et sans avoir eu ce soucis, je vois pas bien ce qui a pu la dégrader.