Cellules vero, endocytose et fusion directe

[Resartus]

Bonjour,
Depuis un an, on ne compte plus les molécules qui ont un effet significatif in vitro sur le SARS-COV2, et ont ensuite des résultats décevants in vivo.
C'est le cas en particulier pour les médicaments qui perturbent l'endocytose, qui est l'une des deux voies d'entrée virale.
L'explication usuelle pour cette inefficacité est que le SARS-COV2 a une grande facilité à entrer par l'autre porte, celle de la fusion directe.
Et j'ai cru comprendre que le type d'entrée est assez spécifique du type de cellule corporelle : certaines acceptent facilement la
fusion directe : poumon, cellules nerveuses d'autres beaucoup moins


Par ailleurs, il me semble que l'usage des cellules vero est très généralisé pour faire ces tests in vitro. .

D'où ma question : serait-il possible que ces cellules (qui sont issues de celluies de rein de singe) fassent justement partie de celles qui ne permettent pas la fusion directe?
Cela expliquerait pourquoi on y trouve avec certaines molécules de bons résultats qui ne sont pas retrouvés in vivo.

Et question subsidiaire : Y a t'il autres types de cultures cellulaires qu'on peut utiliser pour ces tests?

NB aux modo : ma question n'ayant qu'un lointain rapport avec la covid, déplacez-la si vous le souhaitez vers le rubrique biologie
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[TanguyE]

Bonjour,

J'ai pas trop poussé les recherches mais cet article tends à invalider ta théorie sur la fusion directe (même si ce n'est pas le même virus).

Il faut savoir que les tests de molécules in vitro sur des cellules vero se déroulent dans des conditions idéales: les cellules sont parfaitement nourries, la culture se fait en immersion donc le contact avec la molécule testée est maximal et on maitrise presque parfaitement tous les paramètres (température, composition du milieu, concentration de la molécule testée...). Les raisons qui font que les résultats in vivo ne se transfèrent pas bien à l'in vivo sont multiples. Pour commencer, on passe de l'ajout d'une quantité définie de traitement directement sur les cellules infectées à la prise d'un traitement par un animal ou par l'homme (prise orale, injection intraveineuse...). Il faut donc que le traitement voyage jusqu'aux cellules cibles, en quantité suffisante et sans dégradation par l'organisme. C'est la pharmacodynamique et la pharmacocinétique de notre molécule (en général ces paramètres sont étudiés en phase préclinique et confirmés par des essais cliniques). La question subsidiaire liée à cela c'est comment formuler ma molécule? Dans les tests in vitro, on dilue la molécule dans le milieu de culture, dans l'in vivo il faut déterminer comment on donne ce traitement (pilule, gélule, spray, injection...) pour qu'il puisse y en avoir suffisamment au bon endroit. Bref, beaucoup de paramètres qui font qu'en général la traduction de l'in vitro vers l'in vivo n'est pas facile.

Pour en revenir aux cellules vero pour le coronavirus, en effet ce n'est clairement pas le meilleur modèle in vitro. Parce que ce sont des cellules de singe et des cellules de rein. Il existe plusieurs types de cellules humaines utilisables pour le coronavirus: A549, Calu-3, NHBE, BEAS2B. Toutes des cellules pulmonaires (certaines issues de lignés cancéreuses donc plus facile à utiliser mais moins pertinentes). Ces cellules sont un meilleur modèle in vitro. On peut aussi penser à utiliser des cultures en 3D d'épithélium respiratoire. Mais vu ce que j'ai expliqué au dessus sur la transition vers l'in vivo, un meilleur modèle in vitro ne garantira pas une meilleure transition. Ce sera plus proche de la réalité et ça peut permettre d'éliminer des pistes qui auront peu de chances de succès.

[ET2x3]

Bonjour,
Voici ce que l'on sait pour le moment. Le virus se fixe sur la cellule en reconnaissant une enzyme, ACE2. Mais le processus d'entrée dans la cellule est une succession d'étapes ultérieures à la reconnaissance d'ACE2. Ce qui semble démontré depuis SarsCov1, c'est que la fusion plasmique (fusion de la membrane du virus et de celle de la cellule, ou voie précoce) est déclenchée par une autre enzyme, la protéase transmembranaire à sérine 2 (TMPRSS2). Si la cellule exprime à sa surface ACE2 mais pas TMPRSS2, le virus entrera par la voie que vous décrivez, la voie endosomale ou tardive. Dans l'endosome, c'est la cathepsine L qui déclenchera la fusion de la membrane virale et celle de l'endosome.
En soi, il est tout à fait possible d'utiliser in vitro des cellules Vero qui expriment TMPRSS2. Dans ce cas, la voie précoce sera privilégiée. Voici le lien qui fait l'expérience pour SarsCov1: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20926566/
On peut donc imaginer que si on teste in vitro sur des cellules Vero qui n'expriment pas TMPRSS2, des molécules fonctionnelles sur la voie endosomale (au hasard, HCQ), on va leur trouver une efficacité remarquable... Car dans ce cas le virus n'entrera que par la voie endosomale. Mais in vivo, on risque de prendre une douche froide...

[Flyingbike]

je n'ai pas le temps de me pencher précisément sur la question, mais voici deux mots-clés qui sont à avoir en tête quand on compare des effets in vivo et in vitro :

pharmacocinétique -> https://fr.wikipedia.org/wiki/Pharmacocin%C3%A9tique
biodisponibilité -> https://fr.wikipedia.org/wiki/Biodis...;intraveineuse.

[A voir en vidéo sur Futura]

[JPL]

Un peu hors sujet. Je connaissais depuis longtemps dans mes lectures l’usage important des cellules de rein de singe en culture mais je ne savais pas que la souche s’appelait vero. Ça réactualise mes connaissances... en vocabulaire

[Bounoume]

il y a plein de souches du meme genre....
en voici une autre: la souche Hela ....
https://www.dihe.fr/blog-superalimen...-medicale.html

[JPL]

Encore une souche "historique" : cancer du sein dont la patiente est morte en 1951.

[TanguyE]

Un peu hors sujet. Je connaissais depuis longtemps dans mes lectures l’usage important des cellules de rein de singe en culture mais je ne savais pas que la souche s’appelait vero. Ça réactualise mes connaissances... en vocabulaire

A noter qu'il existe d'autres cellules de rein de singe qui sont utilisées en labo: LLC-MK2 et MA-104 notamment. Sinon une souche cellulaire très utilisée pour la grippe c'est les MDCK qui sont des cellules de rein de chien.

[Resartus]

Bonjour,
Merci à tous pour vos mines d' informations très détaillées