bonjour!
voili voila je me casse la tete depuis des jours sur cette exo, j ai cherché partt,je ne trouve pas d explication au reponse de l exo!
5- Hybridation moléculaire de type Southern
Le protocole standard utilisé dans notre laboratoire pour réaliser une hybridation moléculaire de type Southern est le suivant.
Lors de l'hybridation proprement dite, la membrane est incubée pendant la nuit à 42šC dans le tampon d'hybridation décrit ci-dessous, en présence de la sonde (de 1 kb et %(G+C)=45% par exemple) préalablement dénaturée. Le lendemain, la membrane est rincée par incubations successives d'une demi heure dans trois solutions de concentrations salines décroissantes (voir composition ci-après), le dernier rinçage étant effectué à 65šC.
Solutions:
* 20X SSC: NaCl 3 M, Citrate de sodium (C6H5Na3O7) 0,3 M, ajuster le pH à 7,0.
* 50X solution de Denhardt: 1% (p/v) Ficoll, 1% (p/v) Polyvinylpyrrolidone, 1% (p/v) Bovine Serum Albumine.
* Solution d'hybridation: 50% formamide, 5X SSC, 1X solution de Denhardt, 20 mM sodium phosphate pH 6,5, 2 mg/ml d'ADN de sperme de hareng préalablement dénaturé 5 mn à 95šC, 5% de dextran sulfate.
* Premier rinçage: 2X SSC, 0,1% SDS (C12H25NaSO4, M=288,38).
* Deuxième rinçage: 0,5X SSC, 0,1% SDS.
* Troisième rinçage: 0,1X SSC, 0,1% SDS.
a- Calculez la température de fusion de la sonde dans les conditions de l'hybridation.
b- Calculez la température de fusion de la sonde dans les conditions du dernier rinçage.
les reponse respectives sont 69 et 72°C
comment arrive t on ces tempe??
pour moi la formule Tm= 69.3+0.41*%G+C ???
j ai du mal a trouver des cours sur ce genre de probleme, qq aurait il une idee?
merci bcp!!
-----