Bonjour, j 'ai un exercice à faire et je suis bloquée. Pourriez vous m'aider s'il vous plaît ?
Voici l'énoncé
Le promoteur du gène celZ précédemment cité veut être identifié. Le site d’initiation de la transcription est déterminé par la méthode d’extension d’amorce en utilisant l’oligonucléotide suivant : ExtZ : 5’ TCTTATCCAAATAAGAGAGC 3’ Le même oligonucléotide est utilisé pour réaliser une réaction de séquence par la méthode de Sanger.
La réaction d’extension d’amorce et la réaction de séquence ont été chargées sur un gel. Le résultat est le suivant :
A partir de ce résultat, positionner le site d’initiation de la transcription et positionner les séquences « -35 » et « -10 ».
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J'ai lu sur le gel la séquence du brin d'ADN complémentaire puis par complémentarité des bases trouve le brin.
séquence : compléùentaire : 5' GTTAACTGTAAATAGAATAGAATAGGCGAT T/GGTTTT 3'
cherché : 5' AAAACC/AATCGCCTATTCTATTCTATTACAGTTAAC 3'
De plus je sais que la séquence -35 est AACTGT (par complémentarité TTGACA) et la séquence -10 est ATATTA (par complémentarité TATAAT).
J'ai retrouvé la séquence -35 sur le brin cherché -> 5' AAAACC/AATCGCCTATTCTATTCTATTACAGTTAAC 3'
Cependant je n'arrive pas à retrouver le site d'initiation et la séquence -10 et je ne sais pas quoi faire de l'oligonucléotide et de l'extention ext Z.
En vous remerciant par avance de votre aide.
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