microscopie filtre rouge

[invite84b0382c]

Bonjour,

Je fais actuellement des marquages fluorescent. Je souhaite utiliser le filtre rouge de mon appareil afin d'effectuer un double marquage filtre rouge versus FITC.

Toutefois, le problème que je rencontre est le suivant: je ne connais pas la largeur du spectre de mon filtre rouge. Quelqu'un connait il la largeur de spectre utilisé en général sur les filtres rouges" ?

Je sais toutefois que la manip est possible pour une longueur d'onde de 555nm.

Je comptais utiliser un anticorps dont l'émission se fait à 568nm. A votre avis, la différence sera t elle si importante ?

Merci par avance .

Akïn
-----

[Jean-Luc P]

Quelqu'un connait il la largeur de spectre utilisé en général sur les filtres rouges" ?

Deux choses sont possibles :
soit tu as un passe-haut, dans ce cas ton filtre laisse passer à partir d'une certaine longueur d'onde. (En général 570-600 nm).
soit tu as un passe bande et dans ce cas c'est plus prècis et tu pourrais avoir un 575 +/- 50 nm ou un 625 +/-75 nm.
Dans ce dernier cas tu peux le déterminer à l'oeil avec de la lumière en trasmission : si ton fonds est plutôt orange -> 575+/-50 , si c'est franchement rouge second cas. Si tu ne vois quasiment rien -> rouge lointain (au-delà de 650 nm).

Le meilleur moyen de le savoir c'est de faire le spectre d'absorbance ou de transmittance (en l'occurence) avec un spectrophotomètre, ça prend moins de 20 min, démontage et remontage du filtre compris.

Je sais toutefois que la manip est possible pour une longueur d'onde de 555nm.
Je comptais utiliser un anticorps dont l'émission se fait à 568nm. A votre avis, la différence sera t elle si importante ?

Entre 555 et 568 la différence n'est pas énorme,, ça a toutes les chances ne marcher si les filtres ne sont très sélectifs : si c'était très sélectif ce serait précisé sur le matériel.