Extraction d'ADN

[invitec065f4ce]

Salut à tous!

Moi c'est Lo et je suis nouveau sur ce forum...
Je suis licencié en bio animale et en ce moment je bosse sur un projet de zoogéographie en vue d'obtenir une bourse fria pour un doctorat en primatologie l'an prochain.
Je travaille sur la phylogénétique des varis et voici mon problème :
Au départ je comptais extraire l'ADN mitochondrial à partir d'un échantillon d'oreille... mais je préfererais, pour le bien-être de ces gentils lémuriens, l'extraire à partir de poils ou de fèces.
Quelqu'un peut-il me conseiller une méthode et un kit d'extraction efficace mais pas trop cher (budget limité )

Merci d'avance et à bientôt

Lo
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[piwi]

Bonjour,

Pour le kit je ne sais pas. Pour le protocole j'ai trouvé celui ci qui est assez précis: http://dendrome.ucdavis.edu/colleagu...etail.php?id=6
Ca n'a pas l'air trop couteux apparemment vu que ca n'est finalement que des solutions assez communes.

Ce qui n'est pas connu c'est la quantité de materiel de départ qu'il faut pour esperer avoir un résultat.

Cordialement,
piwi

[invite84b0382c]

Bonjour,

Notre laboratoire travaille entre autre sur de l'extraction d'ADN issu de valves cardiaques de patients. Nous utilisons pour ca le kit Qiagen (attention, il existe des kits d'extraction d'ARN et d'ADN). Je crois ne pas me tromper en disant qu'il existe plusieurs kit pour l'ADN: kit mini ou midi (ca c'est sur) et peut etre micro.

Renseigne toi sur le site de Qiagen a savoir s'ils ont un kit micro. Si tu es limité sur la quantité d'échantillon, il vaut mieux opter pour le kit d'extraction le plus petit possible (donc kit mini si le kit micro n'existe pas)

Bon courage

Akïn

[inviteffc67642]

Pour les kits Qiagen (que j'utilise aussi), je ne suis pas sûre que ce soit approprié pour l'extraction à partir de poils ou fécès...
En général c'est tjs à partir de suspension cellulaire...
Mais je dis peut être une bétise...

Y a peut etre un kit particulier...

[A voir en vidéo sur Futura]

[piwi]

On est pas là dans le cas d'une extraction simple si j'ai bien compris. Il y a là deux difficultés:
1. purifier les mitochondries
2. Extraire l'ADN

Du coup les kit classiques d'extractions risquent de ne pas donner satisfaction.

Cordialement,
piwi

[inviteffc67642]

En fouillant dans CAT j'ai trouvé ça :

Titre du document / Document title
Rapid isolation of animal mitochondrial DNA by alkaline extraction

Auteur(s) / Author(s)
PALVA T. K. ; PALVA E. T. ;
Affiliation(s) du ou des auteurs / Author(s) Affiliation(s)
Univ. Kuopio, dep. applied zoology, INCONNU
Résumé / Abstract
La technique pour l'isolement rapide d'ADN mitochondrial (mt ADN) à partir de cellules d'animaux, est basée sur le procédé sélectif de dénaturation alcaline de BIRNHOIM et DOLY et évite l'utilisation de la centrifugation en gradient de densité dans le CsCl. Cet ADN obtenu ainsi est suffisamment pur pour l'analyse de restriction et le clonage des fragments d'ADNmt
Revue / Journal Title
FEBS letters (FEBS lett.) ISSN 0014-5793 CODEN FEBLAL Federation of European Biochemical Societies letters
Source / Source
1985, vol. 192, no2, pp. 267-270 (12 ref.)
Langue / Language
Anglais
Editeur / Publisher
Elsevier, Amsterdam, PAYS-BAS (1968) (Revue)

Je sais pas si tu peux y avoir accès, mais il y a peut être des idées à en tirer...

[invite84b0382c]

Je crois me souvenir qu'une centrifugation particulière permet d'isoler les mitochondries (elle est relativement puissante si mes souvenirs sont exactes. Peut être peux tu commencer par ca avant de faire ton extraction.

Akïn

[inviteffc67642]

En général c'est avec chlorure de césium, mais je crois que pour l'utiliser, il faut une quantité d'échantillon assez importante...

En parcourant des matériels et méthodes (de l'équipe de Pierre Taberlet à Grenoble par exemple), ils utilisent le kit Tissue and Blood kit de Qiagen et une PCR pour les ADN mitochondriaux (à partir de biopsie de chèvre).

Par contre, je n'ai rien trouvé à partir de poils.

[invite89f53faf]

moi je suis nouveau sur le sujet et j'aimerais seulement un peut comprendre, selon moi et ce que j'ai entendu l'adn peu se retrouver dans un cheveux ou un poil pas vrais ?

[inviteffc67642]

Salut,

Et bien, oui il y a de l'ADN dans les cheveux et les poils.
Mais je ne comprends pas bien ta question, on parlait de méthode d'extraction d'ADN.

[invite2ee6fcf9]

BONJOUR

c'est un dm de svt que je dois faire et je n'y arrive pas.

on nous montre une méduse d'ADN qui est blanche.On doit observer ce qui se passe lorsque on ajoute le réactif de Schiff.Vous savez ce qui se passe?

[invitee1dec981]

Salut,

Et bien, oui il y a de l'ADN dans les cheveux et les poils.
Mais je ne comprends pas bien ta question, on parlait de méthode d'extraction d'ADN.

iL n'y a d'adn que dans la racine du poil, c'est à dire dans les cellules du bulbe foliaire. Le poil n'est qu'une sécrétion protéique de ces cellules.

[invite660980a2]

http://www.futura-sciences.com/fr/ne...netique_13023/

voilà...

Et oui donc il y a de l'ADN dans l'arbre du poil.

Nous pour l'extraction d'ADN de fèces, on utilise le DNA Stool kit de QIAgen