Bonjours tous le monde,
Je me décide à poster ici car je ne trouve pas d'explications à mon problèmes.
Dans le cadre de mon travail, j'effectue des infections avec des bactéries pathogènes pour l'homme sur des macrophages afin de suivre le trafic intracellulaire de ces bactéries.
Après culture, je fixe mes échantillon en PFA3%, rinçage au PBS puis immunofluorescence (double marquage de mon pathogène ET d'endosomes).
La semaine dernière (le problème est deja arrivé auparavant) j'ai effectué en quarantaine d'IF sur plusieurs échantillons.
Parmi les échantillons, 1 ou 2 échantillons avaient tendance à bleecher très facilement (grosse perte de fluorescence en un temps très court de l'ordre de la seconde).
J'ai beau me poser toutes les questions possibles, je ne trouve pas d'explications: les cellules proviennent de la même souris, les anticorps primaires et secondaires sont issus du même aliquot, la longueur d'onde à laquelle j'observe mes échantillons est la même pour un échantillon "bleechant" et "non bleechant".
Merci par avance de me donner votre avis ET/OU vos hypothèses.
Akïn
-----