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TE dans phenol-chloroforme



  1. #1
    sacharybalka

    TE dans phenol-chloroforme

    Bonjour, je dois suivre un protocole où je dois "ajuster le pH du phénol-chloroforme-alcool isoamylique avec de l'acétate de sodium (50mM) à 4,7"
    Mon problème est le suivant:
    -Phénol-chloroforme pH 8
    -acetate de sodium ph 7,5

    ???????

    c'est peut-être dû à mon mélange phenol-chloroforme?
    Il est tout prêt et "saturé avec le TE pH 8" (traduit de l'allemand).
    Quel doit être son pH de base?
    Une autre explication?
    Sinon je vais équilibrer avec de l'acide actétique...
    Merci d'avance

    -----


  2. #2
    Elendilmir

    Re : TE dans phenol-chloroforme

    Salut,

    A quelle utilisation ton protocole est il destiné?
    Parce que j'ai jamais entendu parler d'ajuster le pH du phénol...

    En général comme tu dis, celui que l'on achète est déjà à pH d'utilisation, et en général est vendu à pH 7,9 saturé avec le tampon qui va bien, pour une utilisation d'extraction d'acide nucléique.

    De plus, si je ne me trompe pas, l'acétate de sodium 50mM pH 5.4 (de tête le pH) est utilisé pour précipiter l'ADN, donc je ne vois pas trop pourquoi combiner phénol et agent précipitant.
    Au contraire, je "dilue" mon ADN avec du TE pH 8.5 pour être sûre que mon ADN reste soluble dans la phase aqueuse...



    En même temps, il me semble qu'on utilise du phénol acide quand on bosse avec des ARN, mais là je ne suis plus du tout compétente.
    Qui s'assied au fond d'un puits pour contempler le ciel le trouvera petit.

  3. #3
    sacharybalka

    Re : TE dans phenol-chloroforme

    salut! oui j'extrait l'ARN du sol. Et apparemment l'acétate de sodium et à pH5 si on fait le tampon avec l'acide acétique, je pense que je vais faire ça, merci beaucoup pour votre reponse

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