Bonjour,
Je suis en deuxième médecine et je prépare mon examen de génétique... malheureusement, j'ai beaucoup de mal avec cett technique de Race PCR. Je ne comprends pas le but et encore moins la technique.
Si quelqu'un savait m'expliquer de manière simple ou m'indiquer un site utile, ce serait super sympa!
Et tant que j'y suis...si vous avez quelques infos sur la PCR avec sonde Taq Man, je suis preneur aussi!
Merci beaucoup!
Sam
Bonsoir
la Race PCR permet d'identifier l'extremité 5' d'un ARNm (donc le point d'initiation de la transcription).
Yoyo
Bonjour,
Comme tu dois le savoir, RACE veux dire Rapid Amplification of cDNA End. On a le 5'-RACE, amplification de la partie 5', et le 3' RACE, l'inverse.
En fait c'est très simple, on utilise la reverse transcriptase pour synthétiser un ADNc simple brin. Pour avoir de l'ADN double brin, il va falloir coller une amorce s'hybridant en 5', mais si on ne connait pas la séquence, on est foutu. C'est pour ça qu'on peut ajouter une queue homopolymérique ou hétéropolymérique en 3' de l'ADNc simple brin généré par la RT, comme ça on peut utiliser une amorce complémentaire à cette queue pour réaliser la PCR, ainsi on ne perd pas l'extrémité 5'.
Dans le cas du 3' RACE c'est l'inverse, et en principe on l'utilise dans le cas de mutagénèse insertionnelle pour savoir où notre fragment c'est insérer. Cette technique permet donc aussi d'identifier les parties en 5' et en 3' d'un fragment connu, et retrouvé dans l'ARNm (puisqu'on parle de cDNA...).
Pour la PCR, regarde >Ici<
Pour la RACE PCR, regarde >Ici< (en anglais)
Greg
Merci beaucoup!!
Bonjour, je suis étudiante en biotechnologies et j'ai dû mal avec la technique de la RACE PCR. Je sais que le but est d'isoler la fin de gènes en 5' ou en 3'. Je sais également qu'on travaille avec de l'ADNc. Mais j'ai du mal avec la technique en elle même. J'ai déjà fait de la race mais j'ai utilisé des amorces que l'on avait fait synthétiser et des amorces UPM et NUP. Est ce que quelqu'un saurait ce que sont NUP et UPM ???
Merci d'avance
Bonjour,
Alors d'après ce que j'ai trouvé sur le net, UPM signifie Universal Primer Mix (mélange d'amorces universelles) et NUP signifie Nested Universal Primer (amorce nichée universelle).
Merci beaucoup !
au niveau des abréviations, on peut également trouver UAP qui signifie Universal Amplification Primer. Pour ma part j'ai déjà réalisé des 3'-RACE-PCR, dont les résultats n'étaient pas très probants (problème de spécificité des amorces), mais jamais de 5'-RACE. J'ai quelques échos de cette technique dont les résultats seraient encore plus aléatoires... Quelqu'un a-t-il déjà réussi à isoler des ADNc avec cette technique ?
J'ai fait de la 5' RACE et de la 3' RACE avec plus ou moins de difficultés. Il m'a fallu recommencer plusieurs fois mais j'ai finalement réussi à avoir un résultat.Envoyé par calypso26
Bonne soirée
