tris-HCL

[inviteec077029]

Bonjour,
j'aimerais savoir pourquoi on utiliser toujours du tampon tris HCL pour diluer les protéines et pas un autre tampon style PBS. Quelle est la fonction du tris HCL sur les proteines.

Merci
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[jmbowie]

Bonjour,
j'aimerais savoir pourquoi on utiliser toujours du tampon tris HCL pour diluer les protéines et pas un autre tampon style PBS. Quelle est la fonction du tris HCL sur les proteines.

Merci

Le Tris est un tampon dit de Good (Good's buffer), terme qui désignent une série de molécules (toutes synthétiques je crois) qui sont de meilleurs tampons biochimiques (pKa de 5 à 8) grâce à plusieurs propriétés, notamment leur stabilité, leur solubilité et leur capacité à ne pas se complexer (ce sont des molécules à la fois cationiques et anioniques).
Donc je pense que c'est utilisé pour minimiser les écarts de pH par rapport au pKa, inévitables pendant les dilutions.

[gorben]

Salut,

Y'a aussi le fait que le PBS ce soit 50 mM potassium phosphate et 150 mM NaCl alors que generalement le Tris c'est 10-20 mM. Tout depend de l'utilisation de ta proteine par la suite mais autant de sel et de potassium phosphate ca peut poser probleme.
De plus le NaCl pose egalement un probleme sur la structure de la proteine. Si cette derniere necessite un ou plusieurs ions metaliques (Mg2++, Zn++ etc...) le Chlore risque de le recuperer et de destabiliser, voire denaturer ta proteine.

A+

[Yoyo]

salut

le tris n'est pas vraiment un tampon tres fort il faut donc se méfier de ce que l'on mets dedans
Si on veut vraiment un bon pouvoir tamponnant on prends de l'HEPES.

Yoyo

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteec077029]

Merci beaucoup pour toute vos réponses.
Pour la conservation de mes protéines j'utilise le tris-HCL, et pour Les ELISA de ces mêmes protéines j'utilise pour diluer du PBS parceque on me l'a conseillé mais je comprend pas pourquoi tout d'un coup je passe au PBS.
Dans les protocoles d'ELISA c'est souvent le PBS qu'on utilise mais..

[gorben]

Le mieux pour conserver tes proteines c'est le tampon TGED (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 10% glycerol, 1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol [DTT]). Si c'est de la conservation longue duree alors tu augmentes le glycerol a 50 % et stockage a -80 deg.

Le PBS pour l'elisa je dirais que c'est plus par convention que par reelle utilitee. Le PBS est un tampon tres utilise pour pas mal de choses et il a le gros avantage d'avoir une osmolarite proche de celle de tes cellules.

[inviteec077029]

Merci beaucoup!

[invite049fbf4b]

Le mieux pour conserver tes proteines c'est le tampon TGED (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 10% glycerol, 1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol [DTT]). Si c'est de la conservation longue duree alors tu augmentes le glycerol a 50 % et stockage a -80 deg.

Le PBS pour l'elisa je dirais que c'est plus par convention que par reelle utilitee. Le PBS est un tampon tres utilise pour pas mal de choses et il a le gros avantage d'avoir une osmolarite proche de celle de tes cellules.

Bonjour, votre discussion m'intéresse tout particulièrement. Lorsque je purifie une protéine, il est donc conseillé de la placer en tampon TGED. Mais pour certaines manips, lors de l'étude de la protéine, le glycérol va gêner. Il faudrait donc une étape supplémentaire d'ultrafilatration/dialyse pour éliminer le glycérol? comemnt procédez-vosu d'ordinaire?

[gorben]

Salut,
Generalement je concentre ma proteine et change le tampon directement apres elution par centrifugation sur colonne (microcon ou autre). Je m'arrange aussi pour concentrer ma proteine au minimum 100x. Comme ca quand j'ai au max 0.5% de glycerol final.

Si le glycerol est vraiment un probleme, il peut peut etre enleve ou reduit, mais la proteine se conservera moins bien (bien que j'ai deja conserve des proteines dans du PBS pendant plusieurs mois a -80 sans voir de reels changements)

A+

[helachaghal]

Bonjour ,
La germination des spores est plus rapide en présence de Tampon Tris ( comparée à un autre tampon) .
Est-ce que quelqu'un connait la raison de cette germination rapide ?

Merci .